Construction and Biofilm Formation of yibT-and-csgD-deleted Salmonella typhimurium
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摘要:目的 通过构建鼠伤寒沙门菌（Salmonella typhimurium）yibT、csgD双基因缺失株及缺失株的回补株，探究其对鼠伤寒沙门菌生物膜形成的影响，以期为沙门菌的有效防控提供新策略。方法 以鼠伤寒沙门菌野生株CVCC541（wild-type, WT）为研究对象，利用λ-red同源重组技术构建yibT和csgD基因缺失株；利用重组载体技术构建其基因回补株；利用结晶紫染色法比较鼠伤寒沙门菌突变株生物膜形成能力的差异；通过苯酚-硫酸法测定胞外多糖含量、半固体平板测定运动能力的变化；比较不同突变菌株自聚集能力的变化；通过扫描电镜观察生物膜结构；最后利用荧光定量PCR技术鉴定生物膜形成过程中关键基因的mRNA表达水平。结果 成功构建了鼠伤寒沙门菌yibT和csgD的双基因缺失株WTΔyibTΔcsgD和csgD基因单缺失株WTΔcsgD及基因缺失株的回补株WTΔcsgDΔyibT/pcsgD和WTΔcsgD/pcsgD。 yibT和csgD基因的缺失降低了生物膜的形成能力、胞外多糖含量和自聚集能力，增强了运动能力；invF和sdiA基因的mRNA表达水平下降。结论 yibT和csgD基因缺失会降低鼠伤寒沙门菌的生物膜形成能力。Abstract:Objective Strains of Salmonella typhimurium with yibT and/or csgD deleted were created to observe the effect on its biofilm formation for effective prevention and control of the foodborne pathogen.Method The λ-red homologous recombination technique was applied to create the gene-deleted mutants, WTΔyibTΔcsgD and WTΔcsgD, of WT S. typhimurium (CVCC541). Subsequently, the gene-complemented strains were also obtained using recombinant vector technology. Differences of the mutants in biofilm formation were determined by crystal violet staining, content of exopolysaccharide measured by phenol-sulfuric acid, mobility tested on semi-solid agar plates, and self-aggregation monitored. Under a scanning electron microscope, biofilm structure was observed. Finally, mRNA expressions of the target genes in the biofilm were identified by fluorescence quantitative PCR.Result A double-gene deleted WTΔyibTΔcsgD, a WTΔcsgD without csgD, and their respective complemented strains, WTΔcsgDΔyibT/pcsgD and WTΔcsgD/pcsgD, were successfully obtained. The double-gene deletion significantly reduced the ability in forming biofilm, the content of exopolysaccharide, and the aggregation of the genes to targets, and the mRNA expressions of invF and sdiA in WT S. typhimurium.Conclusion Deletion of yibT and csgD significantly impacted some critical biofunctions of S. typhimurium that could become a new approach for control of the foodborne disease.
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Keywords:
- Salmonella typhimurium /
- yibT /
- csgD /
- biofilm
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0. 引言
【研究意义】木薯（Manihot esculenta Crantz）作为世界三大薯类之一，具有极强的适应性，能够抗旱和耐贫瘠，已被广泛种植于全球近百个国家和地区，为全球十分之一以上人口提供主粮[1]。在我国，木薯是广西、广东和海南地区的一种重要的经济作物，不仅是当地重要的经济作物，而且还具有巨大的发展潜力，其淀粉可以用来生产燃料乙醇和工业淀粉，是一种重要的绿色能源作物 [1]。糖基化修饰是一种普遍存在的植物修饰反应，其中催化该反应的酶是糖基转移酶（glycosyl transferases, GTs）。GTs可以将糖基，如葡萄糖、半乳糖和木糖等，添加到不同的天然化合物中，从而形成更稳定的糖酯或糖苷 [2-4]。其中一类使用UDP作为糖基供体的GTs被称为UDP依赖型糖基转移酶（UDP-glycosyltransferases，UGTs） [5]，它们在植物生长发育和逆境胁迫响应过程中发挥着重要作用，主要参与对植物激素和重要次生代谢物的修饰 [6]。地毯草黄单胞菌（Xamthomonas axonopodis pv. Manihotis, Xam）引起的木薯细菌性枯萎病是木薯的主要病害之一 [7- 8]。因此，研究木薯UDP依赖型糖基转移酶基因的功能，对揭示其在木薯应答生物胁迫中的作用机制具有重要意义。【前人研究进展】目前，已经发现的植物GTs家族数量超过100个，几乎所有植物中都发现了这类酶 [9]。在拟南芥中，UGT84B1基因的过表达会导致糖基化生长素的含量升高[10]。过表达UGT73C6和UGT73C5基因会导致转基因植株中糖基化油菜素类固醇的含量增加 [11-12]。ABA在植物应对非生物胁迫，如干旱和高盐中发挥着重要作用，UGTs家族基因也可以通过糖基化修饰来影响ABA在植物体内的稳态 [13]。在拟南芥中，UGT71B6，UGT71B7和UGT71B8等基因可以通过调节ABA的含量来调控植株在非生物逆境中的耐受性 [13-14]。UGT71C5基因的过表达会导致转基因植株对干旱的敏感性增加，这主要是因为ABA的糖酯化使得植株中ABA的含量减少 [15]。植物对生物胁迫的响应主要是通过水杨酸和茉莉酸介导的两条信号通路，这两条通路往往以拮抗的形式起作用 [16-18]。对UGT76B1基因的研究表明，糖基化的小分子参与了连接水杨酸和茉莉酸途径的植物防御信号的转导。缺失UGT76B1基因会提高植株对丁香假单胞菌的抗性，从而降低对坏死性铜斑病链球菌的抗性；而在无病原菌侵染的情况下，过表达UGT76B1基因会使植物利用水杨酸信号通路抵御病菌的能力降低，但同时会提高植物利用茉莉酸信号通路抵御病菌的能力 [19-21]。【本研究切入点】分析木薯UGTs基因家族的转录组数据发现，MeUGT25基因的表达显著受到Xam菌株的诱导。MeUGT25基因与MeUGT85K4/MeUGT85K5具有很高的同源性，但MeUGT85K4/MeUGT85K5基因主要参与木薯生氰糖苷的合成 [22]，而MeUGT25基因的功能仍有待深入研究。【拟解决的关键问题】本研究构建MeUGT25基因的VIGS载体，并采用农杆菌侵染的方式对木薯叶片中的MeUGT25基因进行沉默，评估该基因在木薯抵抗细菌性枯萎病中的作用，以期为进一步研究该基因参与木薯抗细菌性枯萎病的机理奠定基础。
1. 材料与方法
1.1 试验材料
供试木薯品种：华南124（SC124），由中国热带农业科学院提供。
供试试剂：DNA回收纯化试剂盒、质粒提取试剂盒、pMD18-T载体、荧光定量PCR反应试剂、Nimble Cloning克隆试剂盒、反转录试剂盒，均购自天根生化科技（北京）有限公司；限制性核酸内切酶购自Thermo Fisher Scientific公司，PCR引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，pTRV载体由海南大学施海涛老师实验室惠赠。
主要仪器设备：超微量紫外分光光度计（Thermo，美国），PCR仪（耶拿，德国），EPS300电泳仪（Tanon，上海），CT15RT高速冷冻离心机（TECHCOMP，中国），4100凝胶成像仪（Tanon，上海），MX3000荧光定量PCR仪（安捷伦，美国）。
1.2 试验方法
1.2.1 转录组数据分析
从GEO数据库中下载木薯叶片在Xam处理下的表达数据 [23]，并从中挑选MeUGTs基因家族的表达数据进行分析 [7]。
1.2.2 Xam侵染木薯叶片和MeUGT25基因表达分析
首先提前将Xam母液进行复苏，吸取1 mL复苏的菌液至刚配置的LB液体培养基，培养至OD600=0.6左右。用MgCl2溶液稀释重悬菌液至OD600=0.2（MgCl2终浓度10 mmol·L−1，加入万分之五的表面活性剂silwet L-77）。采用种植45 d后的木薯，使用注射器将稀释的菌液从倒数第二片叶片开始接种，接种至少6片木薯叶片。然后置于温室中继续培养（注意保湿） [24]，处理5 d和7 d后，选择倒数第2～3片完全展开叶提取总RNA，进行反转录。使用设计好的MeUGT25基因的定量引物进行荧光定量PCR，内参基因使用木薯MeEF1a基因，根据2−ΔΔCT方法计算基因的相对表达量。
1.2.3 构建MeUGT25基因的干扰载体
根据MeUGT25基因（Manes.04G015600.1）的核苷酸序列挑选干扰片段，干扰片段序列的挑选原则为：插入病毒载体的基因片段长度在200～350 bp；避免UGT基因家族高度保守的序列；挑选MeUGT25基因自身特异的序列；根据以上原则设计干扰载体引物（表1），并通过扩增获得291 bp的片段 [25]。扩增程序：95 ℃ 5 min；35个循环：95 ℃ 10 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s；72 ℃ 10 min；16 ℃ 保存。反应体系：ddH2O 8.0 μL；2×PrimeStar Max 10.0；上游引物/下游引物 0.5 μL；模板 1.0 μL。PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳进行检测，回收目的片段连接至T载体，然后转化大肠杆菌TOP10感受态细胞。测序正确后通过双酶切连接至pTRV载体，进行菌液PCR和双酶切验证，全部正确后保留菌液和质粒。
表 1 引物序列Table 1. Sequences of primers applied引物名称
Primer上游引物
Forward Primer（5′-3′）下游引物
Reverse Primer（5′-3′）用途
UsageMeUGT25 gtgagtaaggttaccgaattcTTTGATTGCCCAGATCGTCG gagacgcgtgagctcggtaccCAGGCTGGTGGCTACAACGG 载体构建 qMeUGT25 CCGGAATTCTTTGATTGCCCAGATCGTCG CGGGGTACCCAGGCTGGTGGCTACAACG 荧光定量 MeEF1a TGAACCACCCTGGTCAGATTGGAA AACTTGGGCTCCTTCTCAAGCTCT 荧光定量 划线部分为上游同源臂/下游同源臂+酶切位点 。
Underline shows upstream homology arm/downstream homologous arm with restriction enzyme digestion sites.1.2.4 病毒诱导MeUGT25基因的沉默
将干扰载体pTRV2-MeUGT25和空白载体pTRV2分别转入农杆菌（GV3010菌株），然后将农杆菌分别注射到木薯叶片中，共注射10个植株，在最下面一片叶片的基部进行注射，注射后的植株置于温室中并注意保湿。侵染14 d后从每株倒数第二片开始取样，取2～3片叶片提取RNA并进行反转录，采用实时荧光定量PCR检测MeUGT25基因的表达量（表1）。反应体系：ddH2O 8.0 μL；2×SYBR qPCR Master Mix 10.0 μL；上游引物/下游引物 0.5 μL；模板 1.0 μL。内参基因使用木薯MeEF1a基因。反应程序：95 ℃预变性30 s；95 ℃10 s，57 ℃ 30 s，40个循环；然后通过熔解曲线（95 ℃ 15 s，57 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s）分析检测引物的特异性。使用2−△△Ct法计算MeUGT25基因的相对表达量（3次生物学重复）。
1.2.5 Xam细菌数量和叶片抗病表型分析
待侵染14 d后检测基因沉默效果，随后选择成功干扰的植株，从靠近基部的叶片开始接种Xam，接种6片；对照叶片也从靠近基部的的叶片开始接种Xam。在接种Xam菌液的0 d和6 d时，分别使用打孔器取侵染后的木薯叶片，每个处理收集10个叶圆盘，叶片样品用无菌水漂洗2 min（重复３次），洗干净后将叶片碾碎。然后将样品进行梯度稀释（103、104、105、106、107、108），取10 μL不同浓度梯度（6个浓度梯度）的菌液接种至LB平板，每个浓度梯度重复3次。平板密封恒温培养箱培养（28 ℃， 16 h），最后统计细菌数量。分别在0 d和6 d时，观察表型变化并拍照记录。
2. 结果与分析
2.1 Xam诱导下MeUGT25基因的表达情况分析
对从GEO数据库中下载的转录组数据进行分析 [23]，发现Xam菌株能够诱导MeUGT25基因的表达上调。进一步使用Xam菌株处理木薯叶片，定量PCR分析显示MeUGT25基因确实受到Xam病菌处理的诱导。在侵染5 d后，MeUGT25基因的表达量达到最高，随后在7 d时表达量下降到正常水平，MeUGT25基因的表达量相比对照0 d最高提高9.2倍（图1）。以上结果表明，MeUGT25基因的表达会受到Xam病菌的诱导。
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图 1 MeUGT25基因在Xam处理下的表达分析*表示与0 d差异显著（P＜0.05）。Figure 1. Expression of MeUGT25 under Xam treatment* indicates significant difference from control (0 d) (P＜0.05).2.2 干扰载体pTRV2-MeUGT25的构建
根据MeUGT25基因的序列，本研究挑选1个291 bp的片段作为干扰片段，其两端添加的酶切位点分别为EcoRⅠ和KpnⅠ。得到扩增片段后进行测序，待测序正确后，将其连接到pTRV2载体，从而得到干扰载体pTRV2-MeUGT25。本研究采用菌液PCR和双酶切方法对构建的载体进行验证。如图2所示，图2A为成功克隆的干扰片段，图2B为酶切后的干扰载体框架，图2C为干扰载体pTRV2-MeUGT25经双酶切后的琼脂凝胶电泳图。这些验证结果表明，干扰载体pTRV2-MeUGT25构建成功。
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图 2 pTRV2-MeUGT25干扰载体构建A：干扰片段克隆；B：pTRV2载体酶切；C：pTRV2-MeUGT25双酶切。Figure 2. Construction of pTRV2-MeUGT25 vectorA: Cloned fragment of MeUGT25; B: digested pTRV2 vector; C: verified pTRV2-MeUGT25 vector by digestion.2.3 沉默植株中MeUGT25基因的表达量分析
VIGS作为快速表征感兴趣基因表型的筛选技术，与传统的基因功能分析方法相比，VIGS能够在侵染植物当代对目标基因进行沉默和功能分析。本研究通过VIGS方法抑制MeUGT25基因的表达，获得3株MeUGT25基因部分沉默的阳性植株，分别命名为MeUGT25V-1、MeUGT25V-2和MeUGT25V-3。荧光定量结果显示，MeUGT25基因的表达量分别降低71%、70%和69%（图3），表明MeUGT25基因在木薯叶片中的表达量受到显著的抑制。
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图 3 叶片中MeUGT25基因被沉默后的表达水平*表示与对照（TRV）差异显著（P＜0.05）。TRV: 对照植株；MeUGT25V-1、MeUGT25V-2、MeUGT25V-3：不同干扰植株。Figure 3. Expression of MeUGT25 after VIGS* indicates significant difference from control (TRV) (P＜0.05); TRV: control plant; MeUGT25V-1, MeUGT25V-2, and MeUGT25V-3: different silenced plants.2.4 MeUGT25基因沉默表达对木薯抗病性的影响
为探究MeUGT25基因在木薯抗病中的功能，分别在对照叶片和阳性干扰植株叶片上接种Xam菌株。如图4所示，对照叶片和阳性干扰植株叶片在接种0 d时，细菌数量没有显著差异；而接种6 d后，MeUGT25V-2和MeUGT25V-3植株叶片上的细菌数量相比对照显著增加，而MeUGT25V-1阳性植株叶片上的细菌数与对照无显著差异。值得注意的是，从叶片的表型图（图5）可以看出，3个干扰植株叶片上的菌斑均比对照叶片明显（图5）。这些结果表明，降低木薯叶片中MeUGT25基因的表达量会显著影响叶片抵抗Xam病菌侵染的能力。
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图 4 MeUGT25基因被沉默后发病叶片中细菌数量的变化情况不同小写字母表示处理间差异显著（P＜0.05）。Figure 4. Bacteria counts in cassava leaves transformed with pTRV-MeUGT25Different lowercase letters indicate significant difference among treatments (P＜0.05).3. 讨论与结论
木薯作为重要的粮食和经济作物，也是未来绿色能源的重要原料之一 [1]，然而细菌性枯萎病对木薯产业造成严重威胁。该病最早在拉丁美洲被发现，并逐渐传播到世界各地。它曾经毁灭性地影响多个国家的木薯产业，也对我国的木薯产业造成严重威胁 [1, 8]。因此，解析木薯抵抗细菌性枯萎病的机制对于木薯产业具有重要意义。
UGTs家族基因在植物的生长发育过程中起着重要作用，其功能是通过对植物激素和重要次生代谢物进行不同程度的糖基化修饰来实现的 [4]。例如，通过调节植物激素如ABA、油菜素类固醇和生长素等物质的含量，UGTs参与植物的发育过程，同时也影响植株对非生物逆境的耐受性 [10-12, 14]。此外，研究表明，UGTs也参与生物胁迫的响应 [21]。例如，缺失UGT74F1基因功能会导致植株中水杨酸水平的降低，从而使植株对病菌变得更加敏感 [26]。此外，ugt76b1突变体中UGT76B1基因的缺失可能导致茉莉酸水平的降低，使植株对特定病菌更加敏感 [21]。此外，研究还发现，通过干扰MeUGT41基因的表达会导致木薯叶片抵抗病菌侵染的能力降低 [27]。在本研究中，MeUGT25基因在叶片中的表达量降低会明显降低叶片对Xam病菌的抵抗力，说明MeUGT25基因具有正调控木薯叶片抵抗细菌性枯萎病的能力。通过序列比对分析发现，MeUGT25基因与UGT76B1/UGT74F1基因有较近的进化关系，推测MeUGT25基因可能通过调节水杨酸和茉莉酸的合成来应对Xam病菌的侵染。然而，在干扰植株MeUGT25V-1中，叶片上的细菌数量与对照叶片相比没有显著差异。类似的现象在其他研究中也有出现，例如抑制小麦中TaLCYB基因的表达，有时会观察到个别转基因阳性植株的表型与对照组相似，这可能是由于其他同源基因的补偿效应所致 [28]。本研究结果为进一步揭示MeUGT25基因在木薯抵抗细菌性枯萎病中的机制提供了基础和线索。下一步的研究可以探究过表达MeUGT25基因是否能提高木薯叶片对细菌性枯萎病的抵抗能力，并探讨水杨酸和茉莉酸的含量是否和MeUGT25基因的表达量相关。
MeUGT25基因可以被枯萎病菌诱导表达上调，而降低木薯叶片中MeUGT25基因的表达量会降低叶片抵抗Xam病菌侵染的能力，因此推测MeUGT25基因在木薯抗枯萎病中发挥着正向调控作用。
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图 1 菌株WTΔyibTΔcsgD:Kan和WTΔcsgD:Kan的PCR鉴定
M：D2000 Marker；1：WTΔyibTΔcsgD:Kan PCR产物；2： WTΔcsgD:Kan PCR产物；3：WT PCR产物。
Figure 1. PCR identification for WTΔyibTΔcsgD:Kan and WTΔcsgD:Kan
M: D2000 marker; 1: PCR product of WTΔyibTΔcsgD:Kan; 2: PCR product of WTΔcsgD:Kan; 3: PCR product of WT.
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图 2 菌株WTΔyibTΔcsgD和WTΔcsgD的PCR鉴定
M：D2000 Marker；1：WT 的 PCR 产物；2：WTΔyibTΔcsgD 的 PCR 产物；3：WTΔcsgD 的 PCR 产物。
Figure 2. PCR identification for WTΔyibTΔcsgD and WTΔcsgD
M: D2000 marker; 1: PCR product of WT; 2: PCR product of WTΔyibTΔcsgD; 3: PCR product of WTΔcsgD.
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图 3 WTΔyibTΔcsgD/pcsgD和WTΔcsgD/pcsgD的PCR鉴定
M：D2000 Marker；1：WTΔyibTΔcsgD/pcsgD的PCR产物；2：WTΔcsgD/pcsgD的PCR产物；3：转入空质粒pET28a的菌 PCR产物。
Figure 3. PCR identification for WTΔyibTΔcsgD/pcsgD and WTΔcsgD/pcsgD
M: D2000 marker; 1: PCR product of WTΔyibTΔcsgD/pcsgD; 2: PCR product of WTΔcsgD/pcsgD; 3: PCR product of bacteria transferred to empty plasmid pET28a.
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图 4 鼠伤寒沙门菌突变株的生物膜形成
A：试管法测定生物膜能力；B：二十四孔板测定生物膜能力；C：生物膜的结晶紫量化。*表示与WT差异显著（P＜0.05），**表示与WT差异极显著（P＜0.01）。下同。
Figure 4. Biofilm formation of S. typhimurium mutants
A: test tube method for determining biofilm formation; B: 24-well plates for determining biofilm formation; C: crystal violet quantization of biofilm. Results are comparisons with WT; *: significant difference at P＜0.05; **: extremely significant difference at P＜0.01. Same for below.
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图 6 鼠伤寒沙门菌突变株胞外多糖含量
A：葡萄糖标准曲线；B：胞外多糖含量。
Figure 6. Exopolysaccharide contents in S. typhimurium mutants
A: glucose standard curve; B: exopolysaccharide content.
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图 7 鼠伤寒沙门菌突变株的运动能力
A：鼠伤寒沙门菌突变株在半固体平板的运动性；B：鼠伤寒沙门菌突变株的运动直径。
Figure 7. Motility of S. typhimurium mutants
A: motility of S. typhimurium mutants on semi-solid plates; B: diameters of moving area of S. typhimurium mutants.
表 1 PCR扩增引物
Table 1 Primers applied for PCR
引物名称
Primer names引物序列5′-3′
Primer sequences引物长度
Primer length/bp反应长度
Reaction length/bpP1 TTTCATCATGTTTAATGAAGTCCATAGTAGTCATGGTCAGTGTAGGCTGGAGCTGCTTC 59 1600 P2 ATCTTTTTGAAAAGATTATAAAGATGTGTCTTAACCGTACATATGAATATCCTCCTTAG 59 P3 GCTGTCAGATGTGCGATT 18 723 P4 TGCTACAATCCAGGTCAGA 19 P5 CCGCTCGAGCCGCCTGAGATTATCGTTTG 29 649 P6 CGCGGATCCATGTTTAATGAAGTCCATAG 29 P7 CAGCCAGGCGTTCCGTGAAT 20 469 P8 AGCCGCCGGTAATATTCCAGAC 22 
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表 2 荧光定量PCR引物序列
Table 2 Primers applied for qRT-PCR
引物名称
Primer names引物序列5′-3′
Primer sequences引物长度
Primer length/bpluxS-F ACTGATGGGCTGCCTGTATC 20 luxS-R
sdiA-F
sdiA-R
invF-F
invF-R
16S-F
16S-RGCCTCTTCGCTATTACGCCA
ATGAAGCGAAGGCGATGT
CGAGGAGCAGCGTAAACT
ACGATGAGAATGCTGGGAGA
TATGTGAAGGCGATGAGTAAC
TTACCCGCAGAAGAAGCACC
CTCAAGGGCACAACCTCCAA20
18
18
20
20
20
20
下载: 导出CSV
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[1] TOBOLOWSKY F A, CUI Z H, HOEKSTRA R M, et al. Salmonella serotypes associated with illnesses after thanksgiving holiday, United States, 1998-2018 [J]. Emerging Infectious Diseases, 2022, 28(1): 210−213. DOI: 10.3201/eid2801.211986
[2] JERTBORN M, HAGLIND P, IWARSON S, et al. Estimation of symptomatic and asymptomatic Salmonella infections [J]. Scandinavian Journal of Infectious Diseases, 1990, 22(4): 451−455. DOI: 10.3109/00365549009027077
[3] LAN Y B, WANG S Z, YIN Y G, et al. Using a surface plasmon resonance biosensor for rapid detection of Salmonella typhimurium in chicken carcass [J]. Journal of Bionic Engineering, 2008, 5(3): 239−246. DOI: 10.1016/S1672-6529(08)60030-X
[4] BORIPUN R, SAENGSAWANG P, INTONGEAD S, et al. Molecular characterization and nucleotide substitution of antibiotic resistance genes in multidrug-resistant Escherichia coli isolated from environmental swine farms [J]. Emerging Contaminants, 2023, 9(4): 100249. DOI: 10.1016/j.emcon.2023.100249
[5] KURTZ J R, GOGGINS J A, MCLACHLAN J B. Salmonella infection: Interplay between the bacteria and host immune system [J]. Immunology Letters, 2017, 190: 42−50. DOI: 10.1016/j.imlet.2017.07.006
[6] CHEN L, GU L P, GENG X F, et al. A novel Cis antisense RNA AsfD promotes Salmonella enterica serovar Typhi motility and biofilm formation [J]. Microbial Pathogenesis, 2020, 142: 104044. DOI: 10.1016/j.micpath.2020.104044
[7] JEFFERSON K K. What drives bacteria to produce a biofilm? [J]. FEMS Microbiology Letters, 2004, 236(2): 163−173. DOI: 10.1111/j.1574-6968.2004.tb09643.x
[8] RÖMLING U, ROHDE M, OLSÉN A, et al. AgfD, the checkpoint of multicellular and aggregative behaviour in Salmonella typhimurium regulates at least two independent pathways [J]. Molecular Microbiology, 2000, 36(1): 10−23. DOI: 10.1046/j.1365-2958.2000.01822.x
[9] JAMES G, SWOGGER E, WOLCOTT R, et al. Biofilms in chronic wounds [J]. Wound Repair and regeneration, 2008, 16(1): 37−44. DOI: 10.1111/j.1524-475X.2007.00321.x
[10] HAESLER E, SWANSON T, OUSEY K, et al. Clinical indicators of wound infection and biofilm: Reaching international consensus [J]. Journal of Wound Care, 2019, 28(Sup3b): s4−s12. DOI: 10.12968/jowc.2019.28.Sup3b.S4
[11] LIU J L, JIA R, ZHOU E Z, et al. Antimicrobial Cu-bearing 2205 duplex stainless steel against MIC by nitrate reducing Pseudomonas aeruginosa biofilm [J]. International Biodeterioration & Biodegradation, 2018, 132: 132−138.
[12] LI W K, ZHENG T L, MA Y Q, et al. Current status and future prospects of sewer biofilms: Their structure, influencing factors, and substance transformations [J]. Science of the Total Environment, 2019, 695: 133815. DOI: 10.1016/j.scitotenv.2019.133815
[13] OJIMA-KATO T, YAMAMOTO N, NAGAI S, et al. Application of proteotyping Strain Solution™ ver. 2 software and theoretically calculated mass database in MALDI-TOF MS typing of Salmonella serotype [J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2017, 101(23/24): 8557−8569.
[14] FUKUYAMA Y, OJIMA-KATO T, NAGAI S, et al. Improved MALDI-MS method for the highly sensitive and reproducible detection of biomarker peaks for the proteotyping of Salmonella serotypes [J]. Journal of Mass Spectrometry, 2019, 54(12): 966−975. DOI: 10.1002/jms.4469
[15] SI H M, ZHANG F, WU A N, et al. DNA microarray of global transcription factor mutant reveals membrane-related proteins involved in n-butanol tolerance in Escherichia coli [J]. Biotechnology for Biofuels, 2016, 9: 114. DOI: 10.1186/s13068-016-0527-9
[16] WANG Z Q, XUE T L, HU D S, et al. A novel butanol tolerance-promoting function of the transcription factor rob in Escherichia coli [J]. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology, 2020, 8: 524198. DOI: 10.3389/fbioe.2020.524198
[17] 岳敏, 赵威, 王涛, 等. YibT介导鼠伤寒沙门氏菌生物膜形成的分子机制研究 [J]. 动物医学进展, 2022, 43(6):46−51. DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2022.06.009 YUE M, ZHAO W, WANG T, et al. Molecular regulatory mechanism of biofilm formation of Salmonella mediated by protein yibT [J]. Progress in Veterinary Medicine, 2022, 43(6): 46−51. (in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2022.06.009
[18] 王涛, 赵威, 裴芳樱, 等. 鼠伤寒沙门菌yibT基因缺失株的构建及其生物学特性分析 [J]. 中国兽医科学, 2020, 50(3):338−345. WANG T, ZHAO W, PEI F Y, et al. Construction of a Salmonella typhimurium CVCC541 ΔyibT strain and study on its biological characteristics [J]. Chinese Veterinary Science, 2020, 50(3): 338−345. (in Chinese)
[19] MANGWANI N, KUMARI S, DAS S. Bacterial biofilms and quorum sensing: Fidelity in bioremediation technology [J]. Biotechnology & Genetic Engineering Reviews, 2016, 32(1/2): 43−73.
[20] RUPP M E, ULPHANI J S, FEY P D, et al. Characterization of the importance of polysaccharide intercellular adhesin/hemagglutinin of Staphylococcus epidermidis in the pathogenesis of biomaterial-based infection in a mouse foreign body infection model [J]. Infection and Immunity, 1999, 67(5): 2627−2632. DOI: 10.1128/IAI.67.5.2627-2632.1999
[21] OBE T, NANNAPANENI R, SHARMA C S, et al. Homologous stress adaptation, antibiotic resistance, and biofilm forming ability of Salmonella enterica serovar Heidelberg ATCC8326 on different food-contact surfaces following exposure to sublethal chlorine concentrations1 [J]. Poultry Science, 2018, 97(3): 951−961. DOI: 10.3382/ps/pex346
[22] HE S K, ZHAN Z Q, SHI C L, et al. Ethanol at subinhibitory concentrations enhances biofilm formation in Salmonella enteritidis [J]. Foods, 2022, 11(15): 2237. DOI: 10.3390/foods11152237
[23] GOMES L C, MERGULHÃO F J. SEM analysis of surface impact on biofilm antibiotic treatment [J]. Scanning, 2017, 2017: 2960194.
[24] AKIYAMA H, HUH W K, YAMASAKI O, et al. Confocal laser scanning microscopic observation of glycocalyx production by Staphylococcus aureus in mouse skin: Does S. aureus generally produce a biofilm on damaged skin? [J]. British Journal of Dermatology, 2002, 147(5): 879−885. DOI: 10.1046/j.1365-2133.2002.04962.x
[25] KALAI CHELVAM K, CHAI L C, THONG K L. Variations in motility and biofilm formation of Salmonella enterica serovar Typhi [J]. Gut Pathogens, 2014, 6(1): 2. DOI: 10.1186/1757-4749-6-2
[26] RAMESH N, JOSEPH S W, CARR L E, et al. Evaluation of chemical disinfectants for the elimination of Salmonella biofilms from poultry transport containers [J]. Poultry Science, 2002, 81(6): 904−910. DOI: 10.1093/ps/81.6.904
[27] KARYGIANNI L, REN Z, KOO H, et al. Biofilm matrixome: Extracellular components in structured microbial communities [J]. Trends in Microbiology, 2020, 28(8): 668−681. DOI: 10.1016/j.tim.2020.03.016
[28] MAN L L, XIANG D J. Effect of Lu xS/AI-2-mediated quorum sensing system on bacteriocin production of Lactobacillus plantarum NMD-17 [J]. Folia Microbiologica, 2023, 68(6): 855−866. DOI: 10.1007/s12223-023-01060-0
[29] CHOI J, SHIN D, KIM M, et al. LsrR-mediated quorum sensing controls invasiveness of Salmonella typhimurium by regulating SPI-1 and flagella genes [J]. PLoS One, 2012, 7(5): e37059. DOI: 10.1371/journal.pone.0037059
[30] CARNEIRO D G, ALMEIDA F A, AGUILAR A P, et al. Salmonella enterica optimizes metabolism after addition of acyl-homoserine lactone under anaerobic conditions [J]. Frontiers in Microbiology, 2020, 11: 1459. DOI: 10.3389/fmicb.2020.01459
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