Effects of Repeated Brewing on Dissolution of Fujian White Tea Components
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摘要:目的 探讨白茶不同泡次茶汤内含物溶释的特点和规律，为白茶工艺、品质改进及科学饮茶提供理论依据。方法 选择2个茶树品种不同茶叶等级共4个茶样，按白茶审评方法冲泡茶汤，测定3泡次内含物的溶出量、溶出率。结果 （1）4个茶样各内含物3泡总溶出量均值为多酚类（9.56 g·hg−1）＞儿茶素（4.78 g·hg−1）＞可溶性糖（4.26 g·hg−1）＞茶褐素（3.98 g·hg−1）＞茶红素（3.59 g·hg−1）＞咖啡碱（3.26 g·hg−1）＞氨基酸（2.38 g·hg−1）＞黄酮（0.45 g·hg−1）＞茶黄素（0.12 g·hg−1）；3泡总溶出率均值为咖啡碱（78.95%）＞黄酮（70.71%）＞氨基酸（66.69%）＞茶褐素（63.98%）＞茶红素（61.97%）＞多酚类（55.77%）＞可溶性糖（53.27%）＞儿茶素（40.42%）＞茶黄素（31.34%），表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、茶氨酸（The）分别为43.31%、63.23%；（2）第1至第3泡溶出率，除茶红素、可溶性糖外，其余内含物呈下降趋势，其中咖啡碱、氨基酸、黄酮第1泡溶出率最高，其在4个茶样第1泡的溶出率均值分别为37.13%、31.54%、29.73%，且3泡总溶出率也高；（3）同一茶样3次冲泡中，水浸出物、多酚类、咖啡碱、黄酮、茶红素溶出量的增减程度均达到显著差异（P＜0.05）水平，而咖啡碱、氨基酸溶出率逐次下降明显，降幅达9%以上；（4）不同茶样相同泡次之间，内含物溶出率总体上未表现出茶叶品种和等级之间的规律性差异。结论 除茶红素、可溶性糖外，其余内含物溶出量、溶出率为第1泡＞第2泡＞第3泡，但内含物之间的溶释效率存在明显差异，咖啡碱、氨基酸、黄酮等溶出较快，而多酚类、儿茶素及EGCG、The等高含量内含物或组分并未充分溶释，尤其是儿茶素、EGCG和表儿茶素没食子酸酯（ECG），其3泡总溶出率均低于50%。Abstract:Objective The dissolved components in the brews of Fujian white teas were investigated.Method 4 local white tea products of 2 cultivar varieties and 2 quality grades were brewed by the standard procedures for sensory evaluation on white tea. The components in the 3 series of brewed teas were analyzed.Result (1) After 3 series of brewing the average total dissolved amounts of the components were 9.56 g·hg−1 for polyphenol, 4.78 g·hg−1 for catechin, 4.26 g·hg−1 for soluble sugar, 3.98 g·hg−1 for theabrownine, 3.59 g·hg−1 for thearubigin, 3.26 g·hg−1 for caffeine, 2.38 g·hg−1 for amino acid, 0.45 g·hg−1 for flavone, and 0.12 g·hg−1 for theaflavin, the average total dissolved rates of the components were 78.95% for caffeine, 70.71% for flavone, 66.69% for amino acid, 63.98% for theabrownine, 63.23% for theanine, 61.97% for thearubigin, 55.77% for polyphenol, 53.27% for soluble sugar, 43.31% for EGCG, 40.42% for catechin, and 31.34% for theaflavin. (2) Except for thearubigin and soluble sugar, all the other components decreased in their dissolved amounts and rates from the 1st to the 3rd brewing, among which caffeine,amino acid and flavone showed the highest average dissolved rates of 37.13%,31.54%,29.73% respectively in the 1st brewing. (3) Polyphenol, caffeine, flavone or thearubigin differed significantly (P＜0.05) between its dissolved amounts of 3 series of brewing of the same sample.The dissolved rates of caffeine and amino acid decreased significantly by more than 9% in one more brewing, while the dissolved rates of the components generally did not show regular differences between the varieties and the grades.Conclusion The dissolved amounts and rates of the components tested, except for thearubigin and soluble sugar, declined from the 1st to the 3rd brewing. In 3 consecutive brewing, due to differences in solubility, caffeine, flavone and amino acid rapidly leached, polyphenol and theanine partly dissolved, and less than 50% of catechin, EGCG and ECG in the dry leaf dissolved in 3 brewings.
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Keywords:
- White tea /
- biochemicals /
- repeated brewing /
- dissolved amounts /
- dissolved rates
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0. 引言
【研究意义】仔猪断奶时会遇到严重的饲粮营养应激，大量未消化吸收的蛋白质在肠道内成为细菌的发酵底物；饲粮中含有的大豆球蛋白（Glycinin）和β-伴大豆球蛋白（β-conglycinin）诱发肠道过敏反应，是导致仔猪腹泻的主要原因[1,2]。有研究认为，降低饲粮粗蛋白质（CP）水平2～3个百分点，添加适宜的赖氨酸（Lys）、蛋氨酸（Met）、苏氨酸（Thr）和色氨酸（Trp），不影响仔猪的生长性能，且可显著减少断奶仔猪腹泻率[3]，但降低饲粮CP水平5～6个百分点，即使再添加缬氨酸（Val）、异亮氨酸（Ile）、组氨酸（His）、苯丙氨酸（Phe）等必需氨基酸（AA）以满足仔猪对更多必需氨基酸（Essential amino acid，EAA）的需要，仍显著影响仔猪的生长性能，抑制仔猪肠道发育 [4,5]。近期的研究认为，较低蛋白质饲粮仅平衡EAA会出现部分非必需氨基酸（NEAA）的缺乏，导致EAA在肝脏代谢转化为NEAA，造成重要EAA的不足和比例失衡[6]。因此，大幅降低饲粮CP水平需要考虑NEAA缺乏的问题。【前人研究进展】谷氨酸（Glutamate，Glu）是一种功能性氨基酸，在细胞代谢和生理调节方面具有多种重要作用，研究表明，97%饲粮谷氨酸在胃肠道代谢供能，饲粮添加谷氨酸有利于减少消化道对其他氨基酸的能量代谢[7]。精氨酸（Arginine，Arg）是幼龄哺乳动物的EAA，在蛋白质合成和尿素循环代谢中发挥着重要的生理功能，是合成一氧化氮的前体物，对维持肠道结构与功能的完整、机体免疫和抗氧化应激方面有着重要作用[8] 。猪肠道中栖居着数量庞大、菌群多样的微生物。仔猪断奶阶段消化道发育不完善，肠道菌群的稳态尚未建立，易受多种因素影响[9]，营养应激是造成仔猪断奶后肠道菌群变化的重要因素。有研究表明，饲粮CP水平和氨基酸浓度对肠道菌群组成和丰度会产生一定的影响[10,11]，Rist 等[12]和Heo 等[13]研究认为，低蛋白质饲粮能够抑制断奶仔猪肠道中大肠杆菌和沙门氏菌等有害菌数量，有利于断奶仔猪肠道菌群稳定，减轻断奶仔猪腹泻。本课题组前期的研究表明，仔猪断奶后饲喂低蛋白饲粮并添加重要EAA和Glu可减少仔猪腹泻，降低肠黏膜屏障通透性[14]。【本研究切入点】国内有关降低饲粮蛋白质水平并平衡主要必需氨基酸对断奶仔猪肠道菌群组成影响的相关研究仍然较少[15]，而在较低饲粮蛋白质水平（饲粮蛋白质水平降低幅度超过5个百分点）平衡主要必需氨基酸后添加Glu和Arg对断奶仔猪肠道代谢产物和菌群影响的研究也鲜有报道。【拟解决的关键问题】本研究拟分析较低蛋白质饲粮单一添加Glu或联合添加Glu和Arg对断奶仔猪肠道微生物代谢产物和菌群的影响，为断奶仔猪应用较低蛋白质饲粮提供理论依据。
1. 材料与方法
1.1 试验动物的选择、分组与管理
2021年7月在某猪场开展饲养试验。试验选用遗传背景相似、健康状况良好的断奶仔猪192头，平均断奶日龄为（26±2） d，平均初始体重为（6.96±0.29） kg，依据性别相同、体重相近的原则分成4个处理组，每组含6个重复（栏），每个重复8头猪（公母各4头），预试期3 d，预饲期间所有猪只饲喂同一种断奶过渡饲料；预饲结束时，对仔猪进行逐头称重，上耳牌标示，试验期16 d。试验猪饲养于一座双列式保育猪舍，塑料漏粪地面，每个猪栏约6 m2，配备一个圆形铸铁料桶和一个乳头式饮水器，自由采食粉料，自由饮水。试验期间试验猪的饲养管理及防疫工作按照猪场的操作规程进行。
1.2 试验设计与试验饲粮
采用单因子随机试验设计，试验设4个组，组I（对照组）为常规蛋白质组，饲粮CP水平为21.16%，组II 、组III和组IV为较低蛋白质组，饲粮CP水平分别为15.97%、15.93%和15.95%，组II 按照质量比m（Lys）∶m（Met）+m（Cys）∶m（Thr）∶m（Trp）∶m（Val）∶m（ILe）=100∶60∶65∶20∶68∶60补充相应必需氨基酸，组III在组II 基础上补充1.50% Glu，组IV在组II 基础上补充1.50% Glu和1.00% Arg，试验饲粮营养水平及Glu和 Arg补充量均参照美国国家研究委员会NRC（2012）[16]5～10 kg猪营养需要量进行配制，各组饲粮除CP和AA水平不同外，其他营养素组成和含量均相同，试验饲粮组成与营养水平见表1。
表 1 饲粮组成与营养水平（风干基础）Table 1. Nutritional composition of basal diets (on air-dry basis)项目
Items组I（CK）
Group I组II
Group II组III
Group III组IV
Group IV原料 Ingredient 玉米 Corn/% 35.12 48.00 47.00 45.00 豆粕 Soybean meal/% 15.00 6.30 6.20 6.60 膨化大豆
Extruded soybean/%18.00 11.00 12.00 12.00 麦麸 Wheat bran/% 1.70 鱼粉 Fish meal/% 7.00 7.00 7.00 7.00 乳清粉 Whey powder/% 16.00 16.00 16.00 16.00 蔗糖 Sucrose/% 2.00 2.00 2.00 2.00 柠檬酸 Citric acid/% 2.00 2.00 2.00 2.00 豆油 Soybean oil/% 2.50 2.26 2.56 3.15 石粉 Limestone/% 0.30 0.32 0.23 0.47 磷酸氢钙 CaHPO4/% 0.54 0.72 0.82 0.60 食盐 NaCl/% 0.30 0.30 0.30 0.30 氯化胆碱
Choline chloride （50%）/%0.08 0.08 0.08 0.08 L-赖氨酸盐酸盐
L-lysine•HCL/%0.03 0.42 0.41 0.40 DL-蛋氨酸
DL-methionine/%0.09 0.15 0.15 0.15 L-苏氨酸 L-threonine/% 0.03 0.20 0.20 0.20 L-色氨酸 L-tryptophan/% 0.01 0.07 0.07 0.07 L-缬氨酸 L-Valine/% 0.20 0.20 0.20 L-异亮氨酸 L-isoleucine/% 0.21 0.20 0.20 L-谷氨酸 L-glutamate/% 1.50 1.50 L-精氨酸 L-arginine/% 1.00 ①预混料 Premix/% 1.00 1.00 1.00 1.00 合计 Total/% 100.00 100.00 100.00 100.00 ②营养水平 Nutrient levels 消化能
Digestible energy/（MJ·kg−1）14.99 14.42 14.39 14.39 净能
Net energy/（MJ·kg−1）10.55 10.54 10.53 10.54 粗蛋白质 Crude protein/% 21.16 15.97 15.93 15.95 粗脂肪 EE/% 8.03 6.85 7.23 7.74 中性洗涤纤维 NDF/% 7.50 7.45 6.82 6.67 酸性洗涤纤维 ADF/% 5.40 5.37 5.12 5.00 淀粉 Starch/% 24.89 32.01 31.20 30.98 标准回肠可消化氨基酸 Standardized ileal digestible amino acids 赖氨酸 Lys/% 1.09 1.09 1.09 1.09 蛋氨酸 Met/% 0.41 0.41 0.41 0.41 蛋氨酸+胱氨酸 Met+Cys/% 0.65 0.65 0.65 0.65 苏氨酸 Thr/% 0.69 0.69 0.69 0.69 色氨酸 Trp/% 0.23 0.23 0.23 0.23 缬氨酸 Val/% 0.80 0.80 0.80 0.80 异亮氨酸 Ile/% 0.74 0.74 0.74 0.74 亮氨酸 Leu/% 1.41 1.14 1.14 1.13 总谷氨酸 Total Glu/% 3.60 2.67 4.15 4.16 总精氨酸 Total Arg/% 1.36 0.95 0.95 1.96 ①预混料为每千克饲粮提供：维生素A 12 500.00 IU，维生素D3 2 500.00 IU，维生素E 80.00 mg，维生素K3 3.00 mg，维生素B1 2.50 mg，维生素B2 10.00 mg，维生素B6 3.00 mg，维生素B12 0.035 mg，烟酸 30.00 mg，泛酸 15.00 mg，叶酸 0.45 mg，生物素 0.50 mg，铁 140.00 mg，铜 15.00 mg，锌 140.00 mg，锰 30.00 mg， 碘 0.50 mg，硒 0.25 mg；②粗蛋白质为实测值，其他营养指标为计算值。
① Premix provided following nutrients in per kg of diet：VA 12 500.00 IU, VD3 2 500.00 IU, VE 80.00 mg, VK3 3.00 mg, VB1 2.50 mg; VB2 10.00 mg, VB6 3.00 mg, VB12 0.035 mg, nicotinic acid 30.00 mg, pantothenic acid 15.00 mg, folic acid 0.45 mg; biotin 0.50 mg, Fe 140.00 mg, Cu 15.00 mg, Zn 140.00 mg, Mn 30.00 mg, I 0.50 mg, Se 0.25 mg. ② CP is presented as measured; others, calculated values.1.3 样品采集与指标测定
1.3.1 样品采集
饲料样品：在配制试验料时，以处理组为单位从每个包装袋各取150 g饲料，混匀后按照四分法收集饲料样品，冷藏保存待测饲料粗蛋白质含量。每种试验料分别取2个样品，表1中饲粮CP含量为2个样品测定值的平均值。
在试验的第11～13天连续3 d于早晨饲喂前每个重复采用直肠收集法采集无污染粪样少量于5 mL冻存管中，放入液氮罐中迅速冷冻，之后转移至−80 ℃冰箱保存，用于测定粪样中生物胺和短链脂肪酸含量及肠道菌群16S RNA测序。
1.3.2 粪样生物胺和短链脂肪酸
粪样中生物胺和短链脂肪酸含量采用高效液相色谱法[17-18]，生物胺、乙酸和丁酸的测定仪器为RIGOL L3000高效液相色谱仪，丙酸的测定仪器为Thermo U3000高效液相色谱仪。
1.3.3 粪样微生物组成
粪样菌群总DNA参照Omege公司的Omege D40-15试剂盒操作说明进行提取，样本总DNA纯化后，用ND-1000核酸浓度测定仪检测其浓度，采用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测总DNA完整性。16S rRNA V3～V4区扩增、基因测序文库构建和 Illumina Miseq 测序及数据生物学分析等内容委托诺禾致源生物信息科技有限公司完成。
1.4 数据统计分析
采用Excel软件对试验数据进行统计处理，用SPSS26.0统计软件进行方差分析，用Duncan氏法进行多重差异显著性比较，试验结果采用平均值±标准差表示。
2. 结果与分析
2.1 低蛋白质饲粮添加谷氨酸和精氨酸对断奶仔猪粪样生物胺的影响
由表2可知，断奶仔猪粪样腐胺和亚精胺含量组II 、组III和组IV均显著低于组I（P＜0.05），组II 、组III和组IV间差异不显著（P＞0.05）。粪样尸胺含量组II 和组III显著低于组I和组IV（P＜0.05），组I显著低于组IV（P＜0.05），组II 和组III间差异不显著（P＞0.05）。说明降低饲粮蛋白质水平和在此基础上添加谷氨酸均能显著降低断奶仔猪粪样腐胺、尸胺和亚精胺含量；而在低蛋白质水平基础上联合添加谷氨酸和精氨酸能显著降低腐胺和亚精胺含量，但显著升高尸胺的含量。
表 2 低蛋白质饲粮添加谷氨酸和精氨酸对断奶仔猪粪样生物胺的影响Table 2. Effects of low-protein diet supplemented with Glu + Arg on fecal biogenic amines of weaned piglets （单位：µg·g−1）项目
Items组I
Group I组II
Group II组III
Group III组IV
Group IV腐胺
Putrescine36.10±1.45 a 23.31±0.99 b 25.63±0.61 b 27.76±1.67 b 尸胺
Cadaverine8.66±0.48 b 5.65±0.56 c 5.44±0.22 c 13.14±0.65 a 亚精胺
Spermidine57.86±2.21 a 25.44±1.37 b 31.46±1.39 b 27.16±1.31 b 同行数据后不同小写字母表示不同处理间差异显著（P ＜0.05），表3、4同。
Data with different lowercase letters on same row indicate significant difference at P＜0.05; those with same or no letter, no significant difference at P＞0.05. Same for below.2.2 低蛋白质饲粮添加谷氨酸和精氨酸对断奶仔猪粪样短链脂肪酸的影响
由表3可知，断奶仔猪粪样乙酸和丙酸含量各组间差异不显著（P＞0.05）。粪样丁酸含量组II、组III和组IV显著高于组I（P＜0.05），组II 、组III和组IV间差异不显著（P＞0.05）。说明降低饲粮蛋白质水平及添加谷氨酸或联合添加谷氨酸和精氨酸均能显著增加断奶仔猪粪样中丁酸的含量。
表 3 低蛋白质饲粮添加谷氨酸和精氨酸对断奶仔猪粪样短链脂肪酸的影响Table 3. Effects of low-protein diet supplemented with Glu + Arg on fecal short-chain fatty acids of weaned piglets （单位：mg·g−1）项目
Items组I
Group I组II
Group II组III
Group III组IV
Group IV乙酸
Acetic acid1.27±0.09 1.43±0.03 1.280±0.02 1.39±0.03 丙酸
Propionic acid0.78±0.01 0.81±0.03 0.88±0.02 0.77±0.01 丁酸
Butyric acid0.49±0.03 b 0.56±0.04 a 0.61±0.03 a 0.64±0.02 a 2.3 低蛋白质饲粮添加谷氨酸和精氨酸对断奶仔猪肠道菌群多样性的影响
稀释曲线能反映测序数据量的合理性，当曲线趋于平缓时，说明测序数据量渐进合理，更多的数据量也只会产生较少量新的物种，如图1所示，试验各组的稀释曲线趋于平稳，测序深度（Coverage）为99.98%～99.99%，说明测序深度已经覆盖了所有物种，测序结果能反映试验样本中微生物的真实情况。丰度等级曲线（Rank abundance） 能反映样品中物种的丰富度和均匀度，如图1所示，曲线较为平滑，说明各样品中物种分布均匀。
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图 1 粪样稀释性曲线和丰度等级曲线a、b分别为稀释性曲线和OTU丰度等级曲线。Figure 1. Dilution and OTU rank-abundance curves of fecal samplesa and b indicate dilution curve and OTU rank-abundance curve, respectively.试验Alpha多样性（Alpha diversity）分析结果如表4所示，ACE 指数和Chao1 指数表示样本菌群丰富度，Shannon 指数和Simpson 指数表示样本多样性。ACE 指数和Chao1 指数组II和组III均高于组I，但差异均不显著（P ＞0.05），组IV显著高于组I（P＜0.05），组II 、组III和组IV间差异不显著（P ＞0.05）。Shannon 指数组II和组III均高于组I，但差异均不显著（P＞0.05），组IV显著高于组I（P＜0.05），组II 、组III和组IV间差异不显著（P ＞0.05）。Simpson 指数组II 、组III和组IV均显著低于组I（P ＜0.05）。说明低蛋白质氨基酸平衡饲粮有利于提高断奶仔猪肠道菌群丰富度和多样性，低蛋白质氨基酸平衡饲粮同时添加Glu和Arg后，效果更明显。
表 4 低蛋白质饲粮添加谷氨酸和精氨酸对断奶仔猪肠道菌群多样性的影响Table 4. Effects of low-protein diet supplemented with Glu + Arg on intestinal microflora diversity of weaned piglets项目
Items组I
Group I组II
Group II组III
Group III组IV
Group IV物种数目 observed species 568.00±36.27 b 632.33±48.56 a 648.00±62.78 a 680.00±21.23 a 测序深度 Coverage/% 99.99 99.99 99.99 99.98 Shannon指数 Shannon index 4.68±0.18 b 4.92±0.04 ab 4.81±0.11 ab 5.05±0.13 a Simpson指数 Simpson index 0.93±0.01 a 0.86±0.02 b 0.85±0.02 b 0.86±0.05 b Chao1指数 Chao1 index 574.81±74.76 b 631.53±13.40 ab 629.60±17.09 ab 658.02±46.58 a ACE指数 ACE index 590.86±33.17 b 641.19±17.34 ab 646.50±19.77 ab 673.04±47.19 a 2.4 低蛋白质饲粮添加谷氨酸和精氨酸对断奶仔猪肠道菌群结构的影响
如图2-A所示，在门分类水平上，组I与组II 、组III和组IV在菌群组成上有较大差异，组II 、组III和组IV间菌群组成和占比均较为接近。组I断奶仔猪粪样中优势菌群依次为70.62%厚壁菌门（Firmicutes）、20.83%拟杆菌门（Bacteroidetes）、5.83%变形菌门（Proteobacteria），组II 、组III和组IV主要由厚壁菌门和拟杆菌门组成，其中厚壁菌门组II、组III、组IV依次为92.59%、88.41%、89.87%，拟杆菌门组II 、组III、组IV依次为4.86%、7.90%、5.33%，变形菌门组II 、组III、组IV依次为0.45%、1.37%、2.04%，分析结果表明，组II 、组III和组IV厚壁菌门（Firmicutes）相对丰度显著高于组I（P＜0.05），拟杆菌门（Bacteroidetes）和变形菌门（Proteobacteria）相对丰度显著低于组I（P＜0.05）。可见低蛋白质氨基酸平衡饲粮添加Glu或Glu+Arg对粪样菌群在门水平上有明显的影响，提高厚壁菌门相对丰度，降低拟杆菌门和变形菌门相对丰度。
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图 2 粪样中优势菌群结构分布情况A、B、C分别表示肠道菌群在门水平、科水平、属水平上的结构组成。Figure 2. Distribution of dominant fecal microbesA, B, C represented the distruction of fecal dominant microbiota at phylum level, family level, and genus level, respectively.如图2-B所示，在科水平上，相对丰度较高的有：梭菌目下未明确的科（unidentified-Clostridiales）占比组I、组II 、组III和组IV依次为21.75%、45.17%、46.96%和30.36%，消化链球菌科（Peptostreptococcaceae）占比4个组依次为14.65%、15.44%、13.16%和6.57%。
如图2-C所示，在属分类水平上，相对丰度较高的菌属：梭菌目下未明确的属（unidentified-Clostridiales）组I、组II 、组III和组IV占比依次为21.67%、45.07%、46.87%和30.36%，土孢杆菌属（Terrisporobacter）4个组依次为9.85%、11.49%、9.20%和4.23%，布劳特氏菌属（Blautia）4个组依次为5.41%、2.79%、4.23%和19.42%。
统计分析科属分类结果表明，组II 、组III和组IV梭菌目下未明确的科和梭菌目下未明确的属相对丰度显著高于组I（P＜0.05），普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）、肠杆菌科（Enterobacteriaceae）和丁酸球菌属（Lachnospiraceae）相对丰度显著低于组I（P＜0.05），组IV毛螺菌科（Lachnospiraceae）、乳杆菌科（Lactobacillaceae）和布劳特氏菌属（Blautia）、乳杆菌属（Lactobacillus）相对丰度显著高于组I（P＜0.05），组IV消化链球菌科（Peptostreptococcaceae）和土孢杆菌属（Terrisporobacter）相对丰度显著低于组I（P＜0.05）。说明低蛋白质氨基酸平衡饲粮添加Glu或Glu+Arg对粪样菌群在科和属水平上存在明显的影响。
3. 讨论与结论
3.1 低蛋白质饲粮添加谷氨酸和精氨酸对断奶仔猪粪样生物胺的影响
如果仔猪饲粮蛋白质摄入量超过其消化吸收量，未被消化吸收的蛋白质等营养物质进入后肠供微生物发酵利用，在相关酶的作用下产生生物胺等物质，肠道产生的生物胺主要有腐胺、尸胺和亚精胺等。腐胺由鸟氨酸和精氨酸经微生物分解代谢产生，尸胺由赖氨酸经脱羧基反应产生，亚精胺则由鸟氨酸等前体物质产生[19]。本研究结果表明，低CP氨基酸平衡饲粮添加Glu或Glu+Arg均显著降低粪样中腐胺和亚精胺的含量，而低CP氨基酸平衡饲粮添加Glu+Arg比另外3个处理组均显著提高断奶仔猪粪样中尸胺的含量，可能原因是Arg和Lys间存在拮抗作用，饲粮添加Arg后对Lys的消化吸收产生一定的抑制作用，更多的Lys进入后肠用于生成尸胺。总体而言，低CP氨基酸平衡饲粮显著降低断奶仔猪后肠生物胺的含量，有利于仔猪肠道健康。
3.2 低蛋白质饲粮添加谷氨酸和精氨酸对断奶仔猪粪样短链脂肪酸的影响
肠道微生物能够利用未消化蛋白质及碳水化合物产生短链脂肪酸（Short-chain fatty acids，SCFA），也称挥发性脂肪酸（Volatile fatty acid，VFA）。有研究认为，降低饲粮蛋白质含量可减少仔猪盲肠中SCFA含量，但差异不显著[20]。周华[21]的研究发现低蛋白饲粮提高必需氨基酸供给，仔猪盲肠丁酸的浓度呈二次显著增加，乙酸与丙酸则呈线性降低的趋势。本试验结果表明，低CP氨基酸平衡饲粮添加Glu或Glu+Arg均不影响断奶仔猪粪样乙酸和丙酸的含量，这与前人的研究结果相近，但粪样丁酸的含量呈现显著升高，这与相关研究结果不同，可能是本试验3个试验组比对照组饲粮CP水平降幅较大，其饲粮组成中碳水化合物比例比对照组显著提高，有报道认为饲粮中的碳水化合物有利于提高仔猪肠道SCFA含量[22]，因此，3个试验组粪样丁酸含量均显著高于对照组，丁酸含量的增加有利于维护仔猪肠道和机体的健康。
3.3 低蛋白质饲粮添加谷氨酸和精氨酸对断奶仔猪肠道菌群多样性的影响
饲粮成分对动物肠道菌群改变占到相关影响因素比重的57%[23]，有研究认为低蛋白质氨基酸平衡饲粮能增加生长肥育猪肠道菌群多样性和丰富度[24]，王瑶等[25]的研究表明，饲粮蛋白质水平从14.0%降至12.5%时，提高盲肠菌群多样性和丰富度，蛋白质水平降低至11.0%不补充支链氨基酸（Branched-chain amino acid，BCAA），降低菌群整体丰度和多样性，如果补充BCAA则可提高盲肠菌群丰度和多样性，说明过多降低饲粮蛋白质水平可影响肠道菌群多样性和丰富度，但补充BCAA则有利于提高肠道菌群多样性和丰富度。Peng等[26]的研究亦表明，降低饲粮蛋白质水平5个百分点，可提高生长猪结肠菌群多样性。本试验结果表明，饲粮蛋白质水平降低约5个百分点，平衡重要必需氨基酸（组II ）、平衡重要必需氨基酸并补充Glu（组III）对肠道菌群多样性和丰富度影响差异不显著，但有利于增加菌群的多样性，平衡重要必需氨基酸并补充Glu+Arg（组IV）能显著提高肠道菌群多样性和丰富度，这与相关研究结果相似，说明较低饲粮蛋白质水平对断奶仔猪肠道菌群整体的多样性和丰富度有一定影响，而在饲粮较低蛋白质水平上平衡重要必需氨基酸基础上补充Glu+Arg能提高断奶仔猪肠道菌群多样性和丰富度，而肠道菌群多样性的增加有利于提高肠道抵抗致病菌感染的能力，这与该试验组仔猪腹泻率显著低于对照组的试验结果相符合。
3.4 低蛋白质饲粮添加谷氨酸和精氨酸对断奶仔猪肠道菌群结构的影响
肠道菌群在门水平上主要由厚壁菌门（35%~80%）和拟杆菌门（17%~60%）组成[27]。王晶等[24]、王瑶等[25]的研究均表明，降低饲粮蛋白质水平不影响肠道菌群厚壁菌门和拟杆菌门的丰度。而范沛欣[10]的试验得出降低饲粮蛋白质水平，能够提高断奶仔猪结肠菌群厚壁菌门丰度，降低拟杆菌门和螺旋菌门丰度。本试验结果表明降低饲粮蛋白质水平并平衡重要必需氨基酸及补充Glu或Glu+Arg均能增加断奶仔猪粪样菌群厚壁菌门丰度，降低拟杆菌门丰度，试验结果与范沛欣的报道相同，分析相关因素，可能是低蛋白质饲粮虽然降低饲粮CP水平，但饲粮蛋白质消化率更高，同时较大比例补充多种合成氨基酸及Glu或Glu+Arg，使得仔猪肠道可供厚壁菌门所属的蛋白降解梭菌目下未明确的科（unidentified_Clostridiales）和消化链球菌科发酵的底物更多[10]，而且梭菌目下未明确的科（unidentified_Clostridiales）、消化链球菌属、乳杆菌属和链球菌属等能同时利用淀粉和氨基酸，Metzler等[28]认为肠道菌群通常优先利用碳水化合物进行发酵，其次是蛋白质和氨基酸，试验中3个低蛋白质组淀粉含量明显高于对照组，因此，在科和属水平上相关菌群的丰度均高于对照组，使得相关菌群对应的厚壁菌门丰度也显著提高。
变形菌门和肠杆菌科所属的大肠杆菌属和沙门氏菌属等多为致病菌，是引起仔猪腹泻的重要菌群[29]，试验结果显示，3个试验组变形菌门和肠杆菌科的菌群相对丰度明显低于对照组，这与3个试验组仔猪腹泻率显著低于对照组的结果相符合[14]，说明低蛋白质氨基酸平衡饲粮对引发腹泻的肠道菌群有明显的抑制。
肠道稳定的菌群结构对降低断奶仔猪腹泻的发生极其重要，需要开展更多的试验验证，如何合理降低饲粮蛋白质水平并平衡重要必需氨基酸及功能性氨基酸，从而优化断奶仔猪肠道菌群组成，有效缓解因断奶应激引发的腹泻。
综上所述，将饲粮CP水平从21.16%降低至15.97%，平衡重要必需氨基酸并补充Glu+Arg，能降低断奶仔猪肠道生物胺含量，提高丁酸含量，增加肠道菌群多样性和丰富度，影响肠道菌群组成。
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表 1 供试茶样及编号
Table 1 Tea samples and codes
茶样编号
Tea No产地
Place of origin茶树品种
Cultivar品名、等级
Product name & gradeFD1 福建 政和 Zhenghe county, Fujian province 福鼎大白茶 Fuding big & white leaf 白牡丹一级 White peony of 1st grade FD3 福建 政和 Zhenghe county, Fujian province 福鼎大白茶 Fuding big & white leaf 白牡丹三级 White peony of 3rd grade ZD1 福建 政和 Zhenghe county, Fujian province 政和大白茶 Zhenghe big & white leaf 白牡丹一级 White peony of 1st grade ZD3 福建 政和 Zhenghe county, Fujian province 政和大白茶 Zhenghe big & white leaf 白牡丹三级 White peony of 3rd grade 
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表 2 不同泡次对水浸出物溶出量、溶出率的影响
Table 2 Effects of repeated brewing on dissolved amount and rate of water extract
茶样编号
Tea No总量
Total amount/（g·hg−1）溶出量 Amount dissolved/（g·hg−1） 溶出率 Ratio to total amount/% 第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
Total第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
TotalFD1 47.47±1.26 13.53±0.17 a 8.68±0.40 b 5.50±0.06 c 27.71 28.50 18.29 11.59 58.37 FD3 47.70±1.34 12.37±0.27 a 8.39±0.21 b 5.34±0.13 c 26.10 25.93 17.59 11.19 54.72 ZD1 46.18±0.36 12.67±0.55 a 8.58±0.18 b 6.20±0.60 c 27.45 27.44 18.58 13.43 59.44 ZD3 47.11±0.31 12.23±0.70 a 9.02±0.11 b 6.04±0.49 c 27.29 25.96 19.15 12.82 57.93 平均值 Mean values 47.12 12.70 8.67 5.77 27.14 26.96 18.40 12.26 57.62 注：表中溶出量数据为平均值±标准偏差，同行数据之间小写字母（括号外）不同表示泡次之间差异达到显著水平（P＜0.05）；同列数据之间小写字母（括号内）不同表示茶样之间差异达到显著水平（P＜0.05）；未标注则表示同行或同列数据之间无显著差异。表3、表5～7、表9～11同。
Note: Data are mean±standard deviation; those with different lowercase letters on same row indicate significant difference at P＜0.05; those with different lowercase letters on same column (in parentheses) indicate significant difference at P＜0.05; those without marked letter indicate no significant difference. Same for Table 3, 5-7, and 9-11.
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表 3 不同泡次对可溶性糖溶出量、溶出率的影响
Table 3 Effects of repeated brewing on dissolved amount and rate of soluble sugar
茶样编号
Tea No总量
Total amount/（g·hg−1）溶出量 Amount dissolved/（g·hg−1） 溶出率 Ratio to total amount/% 第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
Total第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
TotalFD1 7.89±0.01 1.42±0.00 1.42±0.00 1.41±0.00 4.25 18.00 18.00 17.87 53.87 FD3 8.07±0.01 1.42±0.00 1.42±0.00 1.42±0.00 4.26 17.60 17.60 17.60 52.79 ZD1 7.98±0.02 1.42±0.00 1.42±0.00 1.42±0.00 4.26 17.79 17.79 17.79 53.38 ZD3 8.02±0.01 1.42±0.00 1.42±0.00 1.41±0.00 4.25 17.71 17.71 17.58 52.99 平均值 Mean values 7.99 1.42 1.42 1.42 4.26 17.78 17.78 17.71 53.27
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表 4 不同泡次对氨基酸溶出量、溶出率的影响
Table 4 Effects of repeated brewing on dissolved amount and rate of amino acid
茶样编号
Tea No总量
Total amount/（g·hg−1）溶出量 Amount dissolved/（g·hg−1） 溶出率 Ratio to total amount/% 第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
Total第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
TotalFD1 4.35 1.46 1.00 0.50 2.96 33.33 22.99 11.49 67.81 FD3 3.50 1.20 0.77 0.45 2.42 34.29 22.00 12.86 69.15 ZD1 3.50 1.06 0.80 0.45 2.31 30.29 22.86 12.86 66.00 ZD3 2.76 0.78 0.60 0.38 1.76 28.26 21.74 13.77 63.77 平均值 Mean values 3.53 1.13 0.79 0.46 2.38 31.54 22.40 12.75 66.69
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表 5 不同泡次对咖啡碱溶出量、溶出率的影响
Table 5 Effects of repeated brewing on dissolved amount and rate of caffeine
茶样编号
Tea No总量
Total amount/（g·hg−1）溶出量 Amount dissolved/（g·hg−1） 溶出率 Ratio to total amount/% 第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
Total第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
TotalFD1 4.54±0.20 1.67±0.11 a（a） 1.38±0.04 b（a） 0.65±0.04 c（a） 3.70 36.78 30.4 14.32 81.50 FD3 4.08±0.09 1.66±0.03 a（a） 1.15±0.11 b（b） 0.61±0.10 c（a） 3.42 40.69 28.19 14.95 83.82 ZD1 4.09±0.08 1.59±0.07 a（a） 1.10±0.03 b（bc） 0.57±0.02 c（ab） 3.26 38.88 26.89 13.94 79.71 ZD3 3.76±0.11 1.21±0.06 a（b） 0.98±0.02 b（c） 0.47±0.06 c（b） 2.66 32.18 26.06 12.50 70.74 平均值 Mean values 4.12 1.53 1.15 0.58 3.26 37.13 27.89 13.93 78.95
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表 6 不同泡次对多酚类溶出量、溶出率的影响
Table 6 Effects of repeated brewing on dissolved amount and rate of polyphenol
茶样编号
Tea No总量
Total amount/（g·hg−1）溶出量 Amount dissolved/（g·hg−1） 溶出率 Ratio to total amount/% 第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
Total第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
TotalFD1 17.11±1.90 4.48±0.36 a（a） 3.31±0.37 b 2.24±0.31 c 10.03 26.18 19.35 13.09 58.62 FD3 17.46±1.80 3.73±0.34 a（b） 3.05±0.21 b 2.05±0.14 c 8.83 21.36 17.47 11.74 50.57 ZD1 16.59±0.68 3.75±0.32 b（b） 3.09±0.17 c 2.41±0.21 d 9.25 22.60 18.63 14.53 55.76 ZD3 17.39±2.11 4.48±0.36 a（a） 3.30±0.37 c 2.33±0.31 d 10.11 25.76 18.98 13.40 58.14 平均值 Mean values 17.14 4.11 3.19 2.26 9.56 23.98 18.6 13.19 55.77
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表 7 不同泡次对黄酮溶出量、溶出率的影响
Table 7 Effects of repeated brewing on dissolved amount and rate of flavone
茶样编号
Tea No总量
Total amount/（g·hg−1）溶出量 Amount dissolved/（g·hg−1） 溶出率 Ratio to total amount/% 第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
Total第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
TotalFD1 0.59±0.05 0.22±0.01 a（a） 0.16±0.01 b（a） 0.12±0.00 c（a） 0.5 37.29 27.12 20.34 84.75 FD3 0.73±0.06 0.20±0.01 a（b） 0.17±0.00 b（a） 0.13±0.00 c（a） 0.49 27.40 23.29 17.81 67.12 ZD1 0.62±0.06 0.20±0.01 a（b） 0.15±0.01 b（a） 0.11±0.00 c（a） 0.46 33.33 25.00 18.33 76.67 ZD3 0.67±0.04 0.14±0.00 a（c） 0.11±0.01 b（b） 0.09±0.00 c（b） 0.34 20.90 16.42 13.43 50.75 平均值 Mean values 0.65 0.19 0.15 0.11 0.45 29.73 22.96 17.48 70.71
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表 8 不同泡次对儿茶素溶出量、溶出率的影响
Table 8 Effects of repeated brewing on dissolved amount and rate of catechin
茶样编号
Tea No总量
Total amount/（g·hg−1）溶出量 Amount dissolved/（g·hg−1） 溶出率 Ratio to total amount/% 第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
Total第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
TotalFD1 10.80 1.70 1.60 1.10 4.40 15.74 14.81 10.19 40.74 FD3 11.60 2.00 1.80 1.30 5.10 17.24 15.52 11.21 43.97 ZD1 11.40 2.00 1.50 1.10 4.80 17.54 13.16 9.65 40.35 ZD3 13.70 2.00 1.89 1.10 4.99 14.80 13.80 8.03 36.63 平均值 Mean values 11.88 1.93 1.70 1.15 4.78 16.33 14.32 9.77 40.42
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表 9 不同泡次对茶红素溶出量、溶出率的影响
Table 9 Effects of repeated brewing on dissolved amount and rate of thearubigin
茶样编号
Tea No总量
Total amount/（g·hg−1）溶出量 Amount dissolved/（g·hg−1） 溶出率 Ratio to total amount/% 第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
Total第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
TotalFD1 5.70±0.16 0.79±0.24 a 0.94±0.16 b 1.79±0.03 c 3.52 13.79 16.52 31.32 61.63 FD3 5.99±0.09 0.81±0.01 a 0.96±0.03 b 1.83±0.02 c 3.60 13.59 16.02 30.60 60.22 ZD1 5.82±0.25 0.79±0.01 a 0.98±0.05 b 1.89±0.03 c 3.66 13.62 16.78 32.40 62.79 ZD3 5.62±0.18 0.79±0.00 a 0.95±0.01 b 1.81±0.02 c 3.55 14.08 16.95 32.19 63.21 平均值 Mean values 5.78 0.80 0.96 1.83 3.59 13.77 16.57 31.63 61.97
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表 10 不同泡次对茶黄素溶出量、溶出率的影响
Table 10 Effects of repeated brewing on dissolved amount and rate of theaflavin
茶样编号
Tea No总量
Total amount/（g·hg−1）溶出量 Amount dissolved/（g·hg−1） 溶出率 Ratio to total amount/% 第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
Total第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
TotalFD1 0.36±0.00 0.04±0.00 a（a） 0.04±0.00 a（a） 0.03±0.00 b 0.11 10.55 10.58 8.29 29.42 FD3 0.38±0.00 0.04±0.00 a（a） 0.04±0.00 a（a） 0.03±0.00 b 0.11 11.53 10.03 8.04 29.60 ZD1 0.34±0.00 0.04±0.00 a（a） 0.03±0.00 b（b） 0.03±0.00 b 0.1 10.60 10.21 9.41 30.22 ZD3 0.35±0.00 0.06±0.00 a（b） 0.04±0.00 b（a） 0.03±0.00 c 0.13 17.18 10.71 8.25 36.14 平均值 Mean values 0.36 0.05 0.04 0.03 0.12 12.46 10.38 8.50 31.34
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表 11 不同泡次对茶褐素溶出量、溶出率的影响
Table 11 Effects of repeated brewing on dissolved amount and rate of theabrownine
茶样编号
Tea No总量
Total amount/（g·hg−1）溶出量 Amount dissolved/（g·hg−1） 溶出率 Ratio to total amount/% 第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
Total第1泡
1st brew第2泡
2nd brew第3泡
3rd brew合计
TotalFD1 6.13±0.07 1.37±0.11 a 1.42±0.09 a 1.13±0.05 b 3.92 22.39 23.2 18.39 63.98 FD3 6.38±0.25 1.44±0.14 a 1.47±0.06 a 1.12±0.06 b 4.03 22.57 23.08 17.54 63.19 ZD1 6.17±0.08 1.42±0.03 a 1.43±0.09 a 1.14±0.03 b 3.99 23.04 23.16 18.46 64.66 ZD3 6.20±0.13 1.40±0.10 a 1.46±0.03 a 1.11±0.02 b 3.97 22.64 23.53 17.95 64.11 平均值 Mean values 6.20 1.41 1.45 1.13 3.98 22.66 23.24 18.08 63.98
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