Anti-infection Effects of Modified Yupingfeng Decoction on Dehua Black Chicken Infected with Eimeria Tenella
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摘要:目的 探明玉屏风加减煎剂对柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）感染德化黑鸡抗氧化、抗炎、免疫功能的影响及抗球虫效果。方法 将120只45日龄德化黑鸡随机分为6组，分别是空白对照组（K组）、感染对照组（G组）、常山青蒿低剂量组（CQL组）、玉屏风加减低剂量组（YL组）、常山青蒿高剂量组（CQH组）、玉屏风加减高剂量组（YH组），除空白对照组外，其余各组均感染柔嫩艾美耳球虫，24 h后开始连续7 d饮水给药，第8 d测定比较各组抗球虫指数、免疫功能、抗氧化能力等指标的差异。结果 与感染对照组（G组）相比，中药处理组CQH、YH、CQL、YL的血便、盲肠病变症状依次减轻。除CQH组外，其他组盲肠病变计分、盲肠黏膜下淋巴细胞密度显著或极显著下降（P＜0.05或P＜0.01）；除CQH组OPG显著下降（P＜0.05）外，其他3个中药组OPG下降极显著（P＜0.01）；YL组和YH组盲肠上皮细胞脱落计分极显著降低（P＜0.01）。与CQL、CQH组相比，YL、YH组MDA、盲肠病变计分、盲肠上皮细胞脱落计分和OPG下降极显著（P＜0.01）。与G组相比，4个中药组 IL-6、 IFN-γ、TNF-α、丙二醛（MDA）含量极显著降低（P＜0.01），而 IL-2含量、 SIgA水平、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、 超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化氢酶（CAT）活性、总抗氧化能力（T-AOC）极显著升高（P＜0.01）；YL组IL-2含量、 SIgA水平、GSH-Px活性、SOD活性、CAT活性极显著增高（P＜0.01），YH组GSH-Px、 SOD活性极显著升高（P＜0.01）。与K组相比，G组、CQL组、YL组、CQH组、YH组的相对增重率分别是79.88%、103.49%、107.27%、95.05%、96.06%，抗球虫指数（anti-coccidial index, ACI）分别是96、165.5、177、133.5、162.5。结论 玉屏风加减煎剂对人工感染柔嫩艾美耳球虫德化黑鸡具有更好抗炎、抗氧化、提高免疫功能的免疫调节作用，并相应具有更好的抗球虫效果，且以玉屏风加减低剂量组（YL）抗球虫效果最好。Abstract:Objective To study the effects of modified Yupingfeng decoction on antioxidant, anti-inflammatory and immune function and anti-coccidial effect of Dehua black chickens infected with Eimeria tenella.Methods The treated 120 45-day-old Dehua black chickens were randomly divided into 6 groups, namely, blank control group (K group), infected control group (G group), low-dose group of Radix dichroa and Artemisia annua (CQL group), low-dose group of modified Yupingfeng decoction (YL group), high-dose group of Radix dichroa and Artemisia annua (CQH group), and high-dose group of modified Yupingfeng decoction (YH group). Except for the K group, all other groups were infected with Eimeria tenella. Treatment with the respective decoctions began 24 hours after infection and continued for 7 days. On the 8th day, various indices including anti-coccidial index, immune function, and antioxidant capacity were measured.Results Compared with the infection control group (G group), the symptoms of bloody stool and cecal lesions were alleviated in the CQH, YH, CQL, and YL groups in order. Except for the CQH group, the cecal lesion scores and submucosal lymphocyte density in the cecum were significantly or extremely significantly reduced (P＜0.05 or P＜0.01); oocyst per gram (OPG) was deduced extremely in the other three traditional Chinese medicine groups (P＜0.01), while OPG in CQH group was reduced significantly (P＜0.05); the cecuml epithelial cell shedding score was decreased extremely in YL group and YH group(P＜0.01). Compared with the CQL and CQH groups, the YL and YH groups showed extremely significant reductions in MDA, cecal lesion scores, epithelial cell shedding scores, and OPG levels (P＜0.01). Compared with G group, the contents of IL-6, IFN-γ, TNF-α and malondialdehyde (MDA) in the four Chinese medicine groups were significantly decreased (P＜0.01). In contrast, IL-2 content, SIgA level, and the activity of glutathione peroxides (GSH-Px), superoxide dismutase (SOD), Catalase (CAT) and total antioxidant capacity (T-AOC) were significantly increased (P＜0.01). IL-2 content, SIgA level, and the activity of GSH-Px, SOD, and CAT were significantly increased in the YL group (P＜0.01), and GSH-Px and SOD activities were significantly increased in the YH group (P＜0.01). Compared with K group, the relative weight gain rate of the G group, CQL group, YL group, CQH group, and YH group were 79.88%, 103.49%, 107.27%, 95.05%, and 96.06%, and the ACI were 96, 165.5, 177, 133.5, and 162.5, respectively.Conclusion The modified Yupingfeng decoction has better immunomodulation effect of improving anti-inflammatory, antioxidant and immune function on Dehua black chickens infected with Eimeria tenella, and correspondingly has better anti-coccidia effect, while the Yupingfeng modified low-dose group (YL) has the best anticoccidia effect.
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0. 引言
【研究意义】土壤微生物主要包括细菌、放线菌、真菌等[1]，既是土壤有机质分解与转化的参与者，也是生态系统碳、氮、硫、磷等元素循环的推动者[2]。土壤细菌占土壤微生物总量的70%～90%，对环境变化敏感，可作为评价土壤健康和质量的重要指标，在土壤养分循环和肥力变化中起着重要作用[3-5]。【前人研究进展】近年来，第二代高通量测序技术在土壤微生物等领域得到广泛应用[6]，可以对不同环境下微生物群落的物种组成和相对丰度等进行细致、准确的分析，极大地促进了基因组学研究的进展，为土壤微生物学的深入研究做出了巨大贡献[7]。相较于传统的测序法，高通量测序技术主要运用芯片技术一次可以测定几十万甚至几百万的序列，通过统计测序 DNA的次数实现对 DNA 丰度的准确计算，可以显著降低测序成本。【本研究切入点】由于土壤中会发生许多重要的化学和生化反应，从而导致土壤酸碱度的变化。土壤酸碱度直接影响养分元素存在形式及其生物有效性，土壤为微生物提供其生存及生长所需养分等[8]，由此可见土壤环境一旦变化会直接影响微生物的优势菌群和群落结构。不同作物吸收营养物质和微量元素对土壤 pH值的需求不同，土壤 pH值也会影响种植作物对养分的吸收利用和生长[9]。【拟解决的关键问题】黄泥田是中国南方稻区典型的低产田[10]，主要分布在山地丘陵，pH值平均值4.5，属于酸性土壤。土壤酸化会提高铝、锰的释放数量，导致土壤贫瘠[11]，影响玉米种植产量。合理进行土壤改良，提高黄泥田作物产量，以及土壤改良后土壤微生物群落如何作出响应这方面较少研究。本研究在 Illumina Miseq平台使用高通量测序技术分析不同施肥管理模式下，玉米根际土壤样品中细菌16S rDNA，探讨单一施化肥、化肥与土壤调理剂以及化肥配施秸秆还田施肥措施对土壤细菌多样性、类群组成及结构的影响，以期揭示酸性黄泥田土壤细菌群落结构变化，为改良南方酸性土壤提高生物肥力提供理论依据。
1. 材料与方法
1.1 试验地概况
研究地点位于福建省建瓯市映山龙种业有限公司种植基地，东经118°48′30″，北纬 27°09′26″，海拔116 m，属中亚热带海洋性季风气候，全市年均气温 18.8 ℃，年降雨量约1 700 mm。试验区土壤类型为黄泥田，质地为黏土，耕层土壤pH值4.5，有机质22.40 g·kg−1，全氮 124.00 g·kg−1，碱解氮105.40 mg·kg−1，速效磷146.60 mg·kg−1，速效钾135.00 mg·kg−1，玉米品种为‘泰鲜甜1号’。
1.2 试验设计
试验设置4个处理：不施化肥（CK）、单一施化肥（T1）、化肥配施秸秆还田（T2） 和化肥配施土壤调理剂 （T3），每个处理3次田间重复。2019年3月20日进行试验，小区面积为602 m2。玉米播种行距0.60 m，密度3.6万株·hm−2。T2处理玉米秸秆还田方式为整杆埋入，还田量约为4 800 kg·hm−2。T3处理土壤调理剂原料为白云石粉与牡蛎壳粉各50%混匀，pH 10.5，施用量约为6 kg·hm−2。各处理玉米全生育期施纯N 264 kg·hm−2，播种时一次性施入基肥，旋耕，基施复合肥600 kg·hm−2，氮肥为尿素，复合肥m(N)∶m(P205)∶m(K2O)为 15∶15∶15。4月21日追施纯N 50 kg·hm−2，小喇叭口期配合降雨施纯N 70 kg·hm−2，大喇叭口期配合降雨施纯N 54 kg·hm−2。
于玉米收获期（6月25日）在近玉米株根部10 cm 处打土钻，采集玉米根际土壤（直径3 cm，深度15 cm），每个处理小区多点取样，充分混匀后取样3 次重复，土壤样品各分为2份，约50 g放入实验室−80 ℃保存，供高通量测序分析，进行土壤基本理化性质分析约500 g，参照鲍士旦[12]的方法。
1.3 土壤DNA提取和高通量测序
使用Omega Soil microbial DNA extraction kit提取土壤样品总 DNA，用 NanoDrop2000 测定DNA 的浓度和纯度。以总DNA为模板用引物338F 和806R 对 V3～V4 可变区进行 PCR 扩增。20 μL的扩增体系：10 ng DNA为模板，0.4 μL FastPfu 聚合酶，0.8 μL 引物，2 μL 2.5 mmol·L−1 dNTPs，4 μL 5×FastPfu 缓冲液。扩增反应条件：预变性95 ℃ 3 min；变性95 ℃ 30 s，退火55 ℃ 30 s和延伸72 ℃ 30 s，共27个循环；最后是延伸72 ℃ 10 min。3次重复混合纯化PCR 产物，纯化产物利用Miseq PE300 平台进行测序，由上海美吉生物公司完成。
1.4 数据分析
去除OTU 单序列和嵌合体，在相似度97%水平上利用UPARSE 软件（version 7.1 http://drive5.com/uparse/）进行聚类，有效序列信息物种分类注释使用RDP classifier 软件进行，70%阈值比对Silva数据库（SSU123）。
在97%分类水平上对4组土壤处理进行α多样性相关分析，包括chao1、shannon、coverage、ace、simpson多样性指数。
2. 结果与分析
2.1 测序结果
样本测序列数据结果在NCBI上的登录号为PRJNA678629。由表1可见，对12个土壤样品细菌16s rDNA V3～V4区测序过滤后，获得有效序列数在46 145～56 660，OTUs数在1 476～2 057，在97%相似水平下聚类统计得到各个土壤样品OTU中的丰度信息。T3处理OTUs数最多，较CK处理增加14.98%，T2处理较CK处理减少0.55%，较T1处理增加了20.53%。
表 1 4种施肥措施下根际土壤细菌的序列读数及OTUs数Table 1. Sequences and OTUs of rhizosphere bacterial community under treatments处理 Treatment 序列读数 Reads OTUs数 OTUs CK 50675±1401 b 1789±34 ab T1 46145±2253 b 1476±57 b T2 47686±1571 b 1779±145 ab T3 56660±2119 a 2057±220 a 注：① CK：不施化肥秸秆不还田；T1：常规施肥秸秆不还田；T2：常规施肥秸秆还田；T3：常规施肥加土壤调理剂。② 同列数据后不同小写字母表示差异达显著水平（P＜0.05），下同。
Note: ① CK: Basic soil; T1: Conventional fertilization; T2: Humic acid organic-inorganic mixed fertilizer ; T3: Humic acid biological organic fertilizer；-N 20% Humic acid biological organic fertilizer. ② Data with different lowercase letters on same row denote significant difference between treatments （P＜0.05）, same for the following.2.2 不同施肥处理对玉米根际土壤细菌群落组成和丰度影响
Chao1指数和ACE指数代表细菌群落结构变化，丰富度随数值升高而增高[13]；Shannon指数反映各土壤样品多样性，多样性程度随数值升高而增高；Simpson指数反映细菌类群的优势度[14]。表2所示，物种覆盖率为0.9875～0.9909，T1处理的ACE指数和Chao1指数较CK均有所降低，分别为17.65%和17.88%，T3处理的ACE指数和Chao1指数较T1处理均有显著提高，分别为39.06%和38.83%，说明施用土壤调理剂可以改善土壤细菌群落的丰富程度。
表 2 4种施肥措施下根际土壤细菌的多样性指数Table 2. Bacterial diversity of rhizosphere soil under treatments处理
TreatmentACE指数
ACE indexChao1 指数
Chao1 indexSimpson指数
Simpson indexShannon指数
Shannon index覆盖率指数
Good’s coverageCK 2170±28 ab 2164±28 ab 0.0072±0.0014 a 5.96±0.02 a 0.9889±0.0003 a T1 1787±73 b 1777±69 b 0.0124±0.0004 a 5.53±0.07 a 0.9909±0.0004 ab T2 2175±150 ab 2181±144 ab 0.0063±0.0006 a 5.94±0.13 a 0.9888±0.0005 ab T3 2485±257 a 2467±260 a 0.0115±0.006 a 6.04±0.29 a 0.9875±0.0013 b 2.3 不同处理土壤细菌类群分析
对所有土壤样品OTUs对应的生物分类学信息进行统计，由图1可以看出，变形菌门（Proteobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）、酸杆菌门（Acidobacteria）、绿弯菌门（Chloroflexi）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、芽单胞菌门（Gemmatimonadetes）、浮霉菌门 （Planctomycetes）、蓝藻门（Cyanobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）、Patescibacteria相对丰度较大，相对丰度之和在4组处理中均占到总量93%以上。
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图 1 4种施肥措施土壤细菌门水平下类群比较Figure 1. Bacteria at phyla level in rhizosphere soil under treatmentsCK、T1和T3处理中的优势细菌门均为酸杆菌门、放线菌门、绿弯菌门、变形菌门，与CK相比，单一施化肥处理放线菌门和绿弯菌门相对丰度分别增加4.08%和3.24%，变形菌门相对丰度降低3.08%；与T1相比，配施调理剂（T3）变形菌门和酸杆菌门相对丰度分别增加7.14%和1.29%，放线菌门和绿弯菌门相对丰度分别降低1.77%和9.41%。T2处理优势细菌门为放线菌门、绿弯菌门、变形菌门，与T1相比，配施秸秆还田（T2）变形菌门的相对丰度增加了9.46%，放线菌门和绿弯菌门的相对丰度分别降低了1.44%和7.64%。
由图2可知，在细菌纲分类水平上，α-变形菌纲（Alphaproteobacteria）、放线菌纲（Actinobacteria）、δ-变形菌纲（Deltaproteobacteria）、γ-变形菌纲（Gamm aproteobacteria）、芽单胞菌纲 （Gemmatimonadetes）、酸杆菌纲（Acidobacteria）、拟杆菌纲（Bacteroidia）、厌氧绳菌纲（Anaerolineae）、绿弯菌纲（Chloroflexia）、纤线杆菌纲（Ktedonbacteria）、芽孢杆菌纲（Bacilli）、产氧光细菌纲（Oxyphotobacteria）等相对丰度较大，其相对丰度之和均占到各处理土壤细菌总量的80%以上。
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图 2 4种施肥措施土壤样品细菌纲水平下类群比较Figure 2. Bacteria at class level in rhizosphere soil under treatmentsCK和T1处理细菌优势纲分别为酸杆菌纲、α-变形菌纲、放线菌纲、纤线杆菌纲、γ-变形菌纲，T2处理细菌优势纲为放线菌纲、酸杆菌纲、γ-变形菌纲、α-变形菌纲，化肥配施土壤调理剂放线菌纲、γ-变形菌纲、α-变形菌纲为优势纲。单一施肥的土壤细菌中γ-变形菌纲、酸杆菌纲、纤线杆菌纲的相对丰度较CK分别增加了39.43%、2.55%、15.48%，α-变形菌纲和放线菌纲相对丰度分别降低了29.27%和2.86%。与单一施肥处理相比，化肥配施秸秆还田处理增加了α-变形菌纲和酸杆菌纲的相对丰度，增加60.35%和5.85%，降低了γ-变形菌纲和放线菌纲的相对丰度，降低22.07%和6.5%；化肥配施土壤调理剂处理增加了α-变形菌纲的相对丰度，增加13.28%，γ-变形菌纲、放线菌纲、酸杆菌纲相对丰度分别降低了29.05%、37.06%、49.16%。
对相对丰度排名前50的细菌属进行双向二维聚类，展示多样品间OTUs情况（图3），可以直观通过颜色的梯度及相似程度清楚地获知样本间细菌丰度变化，颜色逐渐加深代表细菌属相对丰度逐渐升高。图3中12个土壤样品分成两大类，CK、T1和T2处理土壤样品细菌群落结构较相似聚为一类，T3单独为一类。由此可知在细菌属水平上，施入土壤调理剂对土壤细菌群落结构影响大于秸秆还田与常规施肥处理。鞘氨醇单胞菌属、芽单胞菌属在T3处理相对丰度最大，丛生放线菌属相对丰度最小。
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图 3 4种施肥措施土壤样品属水平细菌OTUs热图Figure 3. OTUs heatmap of bacterial OTUs at genus level in rhizosphere soil under treatments通过对门水平下土壤细菌种群分布和环境因子的冗余分析，从图4-A可以看出速效钾、总钾和 pH的射线较长，说明对土壤样品中细菌的影响较大，呈显著相关性。图4-B基于属水平下土壤细菌种群分布和环境因子的冗余分析，pH、总磷、总钾和速效钾的射线较长，与土壤细菌呈显著相关性。
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图 4 基于门和属水平下土壤细菌种群分布和环境因子的冗余分析Figure 4. Redundancy analysis on bacterial community at phylum and genus levels in rhizosphere soil and on associated environmental factors3. 讨论
本研究旨在探讨秸秆还田和土壤调理剂的施用对酸性土壤中细菌种群多样性的影响，目前关于这方面的报道还较少。大部分植物适应中性或微酸性土壤生长，土壤 pH值太低会引发植物病虫害，也会增强土壤中有毒金属元素的活性。本试验所用的土壤调理剂原料主要是白云石粉和牡蛎壳粉，有研究表明白云石粉和牡蛎壳粉在对改良酸性土壤方面有明显效果[15]，并且对玉米生物学性状影响方面，也表现出明显的增加效果，可以明显提高玉米地上部生物量、株高、根重与根长，且随土壤调理剂施用量的增加而增加[16]。本研究中，化肥配施土壤调理剂处理的细菌群落丰富度较单一施化肥处理显著提高，这可能是因为土壤调理剂的施入改善了土壤酸性环境，影响了一部分对土壤酸度极其敏感的微生物。合理的秸秆还田也可以在一定范围内改善土壤pH，促使其向中性土壤或是适合所种植作物生长的酸碱度变化，秸秆在土壤微生物的降解下可以释放出大量的有机质，增加细菌多样性[17]。
有研究表明，施用白云石粉可以显著降低土壤中交换性铝含量，并且土壤中有效磷和速效钾含量会随着白云石粉用量的增加而增加[15]；秸秆中含有丰富的钾资源[18-19]，秸秆还田对于土壤速效钾含量的提高具有显著作用[20]，一定范围内土壤速效钾含量的提高会随秸秆还田量的增加而增大[21]。本研究中速效钾、总钾和土壤pH对门水平下土壤细菌种群分布影响较大，呈显著相关性；pH、总磷、总钾和速效钾对属水平下土壤细菌种群分布影响较大，呈显著相关性，可能是由于化肥配施土壤调理剂和秸秆还田提高了土壤养分的有效性，改变了土壤细菌群落生存环境，从而影响土壤细菌类群的相对丰富度。
CK、T1和T3处理中的优势细菌门为酸杆菌门、放线菌门、绿弯菌门、变形菌门，T2处理优势细菌门为放线菌门、绿弯菌门、变形菌门，与前人研究结果一致[22-23]；优势细菌纲有α-变形菌纲、γ-变形菌纲、酸杆菌纲、放线菌纲、纤线杆菌纲。4个处理中的变形菌门相对丰度均为最大，化肥配施秸秆还田和土壤调理剂均提高了变形菌门的相对丰度，变形菌门是细菌域中最大的一门，被广泛用于氮肥的促进利用[24]。有相关研究表明，土壤酸杆菌的相对丰度与土壤 pH 值呈负相关关系[25]，也有研究表明因受土壤其他环境因子影响，酸杆菌的相对丰度与土壤 pH 相关性不显著[26]。本研究中，化肥配施土壤调理剂处理的酸杆菌门相对丰度较单一施化肥处理略有减少，可能是由于施用土壤调理剂增加了土壤中交换性铝含量，酸杆菌细菌中不同亚群对土壤环境因子的适应性存在差异有关。放线菌门可以降解土壤中的各种不溶性有机物质，对有机物的矿化有着重要作用，从而参与自然界氮素循环[27]。单一施化肥处理放线菌门相对丰度大幅提高，可能与全氮的含量与利用有关，化肥配施秸秆还田处理较单一施化肥处理放线菌门的相对丰度略有减少，可能与秸秆还田时间有关，长期施用对放线菌门丰富度的影响会更明显。鞘氨醇单胞菌属对芳香化合物有极为广泛的代谢能力，芽单孢菌属与磷代谢相关，在化肥配施土壤调理剂处理中相对丰度最大。
4. 结论
化肥配施土壤调理剂可以显著提高土壤细菌群落丰富性。化肥配施土壤调理剂对土壤细菌群落结构影响大于单一施化肥和化肥配施秸秆还田处理，单一施化肥降低了土壤细菌丰富度。施用土壤调理剂提高酸性土壤 pH对玉米根际细菌群落影响最大。黄泥田酸性土壤细菌群落结构对秸秆还田和土壤调理剂的响应机制还需要进一步深入研究。
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图 1 玉屏风加减对人工感染球虫德化黑鸡盲肠形态结构的影响（200×）
Figure 1. Effect of modified Yupingfeng decoction on cecuml morphology of Dehua black chicken infected with coccidia （200×）
表 1 试验鸡分组与处理
Table 1 Grouping and treatment of the chicken
组别 Group 动物数 Total number/只 处理 Treatment 空白对照组 K 20 不攻虫不给药 感染对照组 G 20 攻虫不给药 常山青蒿低剂量组 CQL 20 攻虫给药；煎剂2剂量2.5 mL·天−1·只−1 玉屏风加减低剂量组 YL 20 攻虫给药；煎剂1剂量2 mL·天−1·只−1+煎剂2剂量2.5 mL·天−1·只−1 常山青蒿高剂量组 CQH 20 攻虫给药；煎剂2剂量5 mL·天−1·只−1 玉屏风加减高剂量组 YH 20 攻虫给药；煎剂1剂量2 mL·天−1·只−1+煎剂2剂量5 mL·天−1·只−1 
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表 2 盲肠上皮细胞脱落计分标准
Table 2 Cecal epithelial cell shedding scoring criteria
分值 Score 标准 Standard 0 黏膜层上皮完整、细胞形态正常，固有层肠腺数量丰富、分布均匀，淋巴细胞分布均匀；未见明显的炎性改变 1 黏膜层偶见上皮细胞坏死脱落，胞核固缩深染、碎裂或溶解消失；固有层肠腺数量丰富、分布均匀，淋巴细胞分布均匀；未见明显的炎性改变。 2 黏膜层少见上皮细胞坏死脱落，胞核固缩深染、碎裂或溶解消失；固有层肠腺数量丰富、分布均匀，淋巴细胞分布均匀；未见明显的炎性改变。 3 黏膜层多处上皮细胞缺失，固有层裸露；固有层淋巴细胞数量增多，肠腺间距较宽，排列稍不规则，淋巴数量轻度增多。 4 黏膜层大面积上皮细胞缺失，固有层裸露；固有层明显水肿，结缔组织排列疏松，肠腺间距增宽，排列稍不规则，淋巴细胞数量增多。
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表 3 盲肠病变计分标准
Table 3 Cecal lesions scoring criteria
分值
Score标准
Standard0 无肉眼可见病变 1 盲肠肠壁存在少量散在的瘀点，肠壁不增厚，内容物正常 2 盲肠病变病理变化较多，盲肠内容物明显带血，盲肠壁稍增厚 3 盲肠内有多量血液或有肠芯，盲肠壁明显增厚，盲肠中粪便含量少甚至无粪便存在 4 盲肠内充满大量血液或肠芯，盲肠肿大，肠芯中含有粪渣或不含，或鸡死亡
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表 4 玉屏风加减对人工感染球虫德化黑鸡盲肠病变指标的影响
Table 4 Effect of modified Yupingfeng decoction on cecuml lesion scores of Dehua black chicken infected with coccidia
组别
Group盲肠上皮细胞脱落情况计分
Epithelial cell shedding盲肠黏膜下淋巴细胞密度
Submucosal lymphocyte density/
(个·mm−²)空白对照组 K 0 Cc 611.90±107.60 Ab 感染对照组 G 3.50±0.46 Aa 1156.00 ±532.40 Aa常山青蒿低剂量组 CQL 2.75±1.17 Aa 772.40±275.00 Ab 玉屏风加减低剂量组 YL 1.00±0.93 Bb 674.40±85.87 Ab 常山青蒿高剂量组 CQH 3.25±0.71 Aa 916.20±169.20 Aa 玉屏风加减高剂量组 YH 1.25±1.28 Bb 708.00±177.30 Ab 同列数据后不同大、小写字母分别表示差异极显著（P＜0.01）或差异显著（P＜0.05）。下表同。
Different uppercase and lowercase letters in the same column indicate extremely significant difference (P＜0.01) or significant difference (P＜0.05). Same for below.
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表 5 玉屏风加减煎剂对人工感染球虫德化黑鸡增重率的影响
Table 5 Effect of modified Yupingfeng decoction on relative weight gain rate of Dehua black chicken infected with coccidia
组别
Group感染前体重
Average initial weight/g感染7 d后体重
Average final weight/g平均日增重
Average weight gain/g相对增重率
Relative weight gain rate/%空白对照组 K 638.70±85.51 756.00±103.40 117.30 100.00 感染对照组 G 667.90±96.57 760.70±117.20 93.70 79.88 常山青蒿低剂量组 CQL 662.90±120.90 784.30±141.90 121.40 103.49 玉屏风加减低剂量组 YL 657.10±120.30 782.90±138.90 125.80 107.27 常山青蒿高剂量组 CQH 671.40±93.47 782.90±112.50 111.50 95.05 玉屏风加减高剂量组 YH 682.90±94.66 795.70±103.50 112.80 96.16
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表 6 玉屏风加减煎剂对人工感染球虫德化黑鸡ACI的影响
Table 6 Effect of modified Yupingfeng decoction on ACI of Dehua black chicken infected with coccidia
组别
Group存活率
Survival rate/%盲肠病变计分
Lesion平均克粪便卵囊量
Oocyst per gram /(×105)卵囊值
Oocyst valueACI 空白对照组 K 100 0 Cc 0 Dd 0 感染对照组 G 95 2.75±0.70 Aa 8.68±1.03 Aa 40 96.0 常山青蒿低剂量组 CQL 100 1.75±1.17 Ab 5.75±0.96 BCc 20 165.5 玉屏风加减低剂量组 YL 100 1.00±0.53 Bb 4.63±0.83 Cc 20 177.0 常山青蒿高剂量组 CQH 100 2.25±0.71 Aa 7.06±0.86 Ab 40 133.5 玉屏风加减高剂量组 YH 100 1.25±0.46 Bb 5.56±0.72 BCc 20 162.5
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表 7 玉屏风加减对人工感染球虫德化黑鸡血清细胞因子及肠道SIgA抗体的影响
Table 7 Effect of modified Yupingfeng decoction on cytokines and SIgA of Dehua black chicken infected with coccidia
组别Group IL-2/(pg·mL−1) IL-6/(pg·mL−1) IFN-γ/(pg·mL−1) TNF-α/(pg·mL−1) SIgA/(μg·mL−1) 空白对照组 K 178.10±22.00 ABa 20.55±1.75 Bbc 57.42±3.72 Bb 48.83±4.31 Bb 1228.00 ±102.00 Bb感染对照 G 134.70±15.56 Cc 29.64±2.55 Aa 67.78±4.91 Aa 69.01±4.54 Aa 948.60±72.05 Cc 常山青蒿低剂量组 CQL 172.90±18.60 Bb 23.76±2.13 Bb 52.79±3.72 Bb 49.15±5.05 Bb 1225.00 ±57.14 Bb玉屏风加减低剂量组 YL 191.80±9.63 Aa 22.20±1.46 Bbc 52.21±2.30 Bb 48.62±1.91 Bb 1357.00 ±64.49 Aa常山青蒿高剂量组 CQH 183.50±13.08 Aa 20.72±2.03 Bbc 53.25±4.72 Bb 47.22±4.29 Bb 1340.00 ±83.53 Aa玉屏风加减高剂量组 YH 203.90±17.68 Aa 20.12±2.34 Bc 52.43±5.41 Bb 43.78±2.73 Bb 1385.00 ±81.46 Aa
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表 8 玉屏风加减对人工感染球虫德化黑鸡抗氧化功能的影响
Table 8 Effect of modified Yupingfeng decoction on antioxidant indexes of Dehua black chicken infected with coccidia
组别
Group丙二醛
MDA/(nmol·mL−1)谷胱甘肽过氧化物酶
GSH-Px/(U·mL−1)超氧化物歧化酶
SOD/(U·mL−1)总抗氧化能力
T-AOC/(U·mL−1)过氧化氢酶
CAT/(U·mL−1)空白对照组 K 4.31±0.56 Dd 435.90±33.56 Aa 61.21±5.84 Aa 18.45±1.95 BCb 176.00±24.19 Aa 感染对照组 G 8.63±0.58 Aa 182.40±15.43 Ee 26.67±2.90 Dd 16.35±1.21 Cc 112.50±12.19 Cc 常山青蒿低剂量组 CQL 7.53±0.14 Bb 250.90±6.88 Dd 35.91±4.54 Cc 19.16±1.50 Bb 132.60±15.31 Bb 玉屏风加减低剂量组 YL 5.82±0.19 Cc 315.9±20.96 Cc 46.56±5.12 Bb 22.88±1.89 Aa 161.40±9.40 Aa 常山青蒿高剂量组 CQH 6.99±0.47 Bb 287.60±16.27 Cc 38.72±4.48 Cc 20.90±2.18 ABa 150.40±14.87 Aa 玉屏风加减高剂量组YH 5.83±0.45Cc 370.00±18.08 Bb 49.93±6.40 Bb 22.72±2.80 ABa 163.40±25.67 Aa
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-
[1] BLAKE D P, KNOX J, DEHAECK B, et al. Re-calculating the cost of coccidiosis in chickens [J]. Veterinary Research, 2020, 51(1): 115. DOI: 10.1186/s13567-020-00837-2
[2] FATOBA A J, ADELEKE M A. Diagnosis and control of chicken coccidiosis: A recent update [J]. Journal of Parasitic Diseases: Official Organ of the Indian Society for Parasitology, 2018, 42(4): 483−493. DOI: 10.1007/s12639-018-1048-1
[3] 李超, 汤新明, 吕艳丽, 等. 我国鸡球虫抗药性现状和抗药机制研究进展 [J]. 寄生虫与医学昆虫学报, 2021, 28(2):119−128. DOI: 10.3969/j.issn.1005-0507.2021.02.009 LI C, TANG X M, LYU Y L, et al. The present state of drug resistance and its mechanisms research progress of chicken coccidia in China [J]. Acta Parasitologica et Medica Entomologica Sinica, 2021, 28(2): 119−128. (in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1005-0507.2021.02.009
[4] 周颖, 王晓艳, 周靖茹, 等. 中草药防治鸡球虫病研究进展 [J]. 中国家禽, 2021, 43(4):89−95. ZHOU Y, WANG X Y, ZHOU J R, et al. Research advances in the prevention and control of chicken coccidiosis by Chinese herbal medicine [J]. China Poultry, 2021, 43(4): 89−95. (in Chinese)
[5] 王贺, 郭志廷, 李建喜, 等. 常山散对雏鸡感染柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段的防治效果 [J]. 畜牧兽医学报, 2024, 55(3):1278−1289. WANG H, GUO Z T, LI J X, et al. Effect of Radix dichroa powder on the control of Eimeria tenella infection in chick at different developmental stages [J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2024, 55(3): 1278−1289. (in Chinese)
[6] 罗晓琴, 郭志廷, 王贺, 等. 常山口服液治疗鸡球虫病的效果分析 [J]. 畜牧兽医学报, 2024, 55(4):1747−1755. LUO X Q, GUO Z T, WANG H, et al. The therapeutic effect of Changshan oral liquid on chicken coccidiosis [J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2024, 55(4): 1747−1755. (in Chinese)
[7] 林梦娟, 高沙沙, 赵星辰, 等. 常山酮抗原虫作用研究进展 [J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(3):924−933. LIN M J, GAO S S, ZHAO X C, et al. Research progress on antiprotozoal activity of halofuginone [J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2023, 54(3): 924−933. (in Chinese)
[8] 刘帅奇, 李是衡, 刘曼玉, 等. 青蒿防治球虫病研究进展 [J]. 畜牧与兽医, 2024, 56(2):131−135. LIU S Q, LI S H, LIU M Y, et al. Research progress on prevention and treatment of coccidiosis with Artemisia annua [J]. Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2024, 56(2): 131−135. (in Chinese)
[9] 杨金玉, 张海军, 王晶, 等. 葡萄原花青素对感染柔嫩艾美尔球虫肉仔鸡生长性能和免疫功能的影响 [J]. 动物营养学报, 2016, 28(9):2802−2811. DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2016.09.019 YANG J Y, ZHANG H J, WANG J, et al. Effects of grape procyanidins on growth performance and immune function of broiler chicks challenged with Eimeria tenella [J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(9): 2802−2811. (in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2016.09.019
[10] 文贵辉, 胡丹, 肖海思, 等. 日粮中添加白术多糖对鸡球虫病的防控效果 [J]. 经济动物学报, 2019, 23(3):149−151. WEN G H, HU D, XIAO H S, et al. Polysaccharide of Atractylodes macrocephala reduces the incidence of coccidiosis in green-shelled laying hens [J]. Journal of Economic Animal, 2019, 23(3): 149−151. (in Chinese)
[11] 周爽, 王占琪, 石雨彤, 等. 酵母细胞壁多糖对柔嫩艾美耳球虫感染雏鸡血清抗氧化能力的影响 [J]. 北京农学院学报, 2023, 38(1):66−71. ZHOU S, WANG Z Q, SHI Y T, et al. Effect of yeast cell wall polysaccharides on antioxidant capacity in serum of chickens infected by Eimeria tenella [J]. Journal of Beijing University of Agriculture, 2023, 38(1): 66−71. (in Chinese)
[12] 李雪梅, 易宗容. 饮水中添加油樟叶精油对鸡人工感染球虫的疗效观察 [J]. 中国饲料, 2023, (10):9−12. LI X M, YI Z R. Observation on the effect of adding essential oil from Cinnamomum longepaniculatum leaf to drinking water in chicks artificially infected with coccidium [J]. China Feed, 2023(10): 9−12. (in Chinese)
[13] 蒋山翊, 周碧君, 文明, 等. 中药联合复合益生菌对鸡柔嫩艾美耳球虫的预防作用 [J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5):2092−2102. JIANG S Y, ZHOU B J, WEN M, et al. Prevention of traditional Chinese medicine with probiotics on Eimeria tenella [J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2023, 50(5): 2092−2102. (in Chinese)
[14] 曾玉娟. 抗球虫中药组方筛选及对感染柔嫩艾美尔球虫肉鸡健康的影响[D]. 雅安: 四川农业大学, 2023. ZENG Y J. Screening of anticoccidial Chinese medicine prescriptions and their effects on the health of broilers infected with Eimeria tenella[D]. Yaan: Sichuan Agricultural University, 2023. (in Chinese)
[15] 陈志炫, 陈丹心, 郑巧霞, 等. 德化黑鸡产业的现状与发展建议 [J]. 福建畜牧兽医, 2020, 42(2):43−45. DOI: 10.3969/j.issn.1003-4331.2020.02.016 CHEN Z X, CHEN D X, ZHENG Q X, et al. Present situation and development suggestions of Dehua black chicken industry [J]. Fujian Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, 2020, 42(2): 43−45. (in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1003-4331.2020.02.016
[16] 林雪玲, 胡美华, 林祚贵, 等. 玉屏风煎剂对德化黑鸡生长性能、免疫调节、血清生化指标的影响 [J]. 福建农业学报, 2024, 39(4):369−377. LIN X L, HU M H, LIN Z G, et al. Effects of Yupingfeng decoction on growth performance, immune function and serum biochemical indices on Dehua black chicken [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2024, 39(4): 369−377. (in Chinese)
[17] 国家市场监督管理总局, 国家标准化管理委员会. 动物球虫病诊断技术: GB/T 18647—2020[S]. 北京: 中国标准出版社, 2020. [18] JOHNSON J, REID W M. Anticoccidial drugs: Lesion scoring techniques in battery and floor-pen experiments with chickens [J]. Experimental Parasitology, 1970, 28(1): 30−36. DOI: 10.1016/0014-4894(70)90063-9
[19] DE PABLOS L M, DOS SANTOS M F B, MONTERO E, et al. Anticoccidial activity of maslinic acid against infection with Eimeria tenella in chickens [J]. Parasitology Research, 2010, 107(3): 601−604. DOI: 10.1007/s00436-010-1901-3
[20] 李薛强, 崔莹, 郝凌魁, 等. 复合菌培养物对母猪生产性能、免疫功能及抗氧化能力的影响 [J]. 动物营养学报, 2019, 31(11):5345−5353. LI X Q, CUI Y, HAO L K, et al. Effects of compound bacteria culture on performance, immune function and antioxidant capacity of sows [J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2019, 31(11): 5345−5353. (in Chinese)
[21] PAKANDL M. Coccidia of rabbit: A review [J]. Folia Parasitologica, 2009, 56(3): 153−166. DOI: 10.14411/fp.2009.019
[22] 葛洪. 肘后备急方[M]. 天津: 天津科学技术出版社, 2021. [23] 张德福. 氢溴酸常山酮抗柔嫩艾美耳球虫作用研究[D]. 杭州: 浙江大学, 2012. ZHANG D F. Study on the Anti-Eimeria tenella effect of halofuginone hydrobromide[D]. Hangzhou: Zhejiang University, 2012. (in Chinese)
[24] MCQUISTION T E, MCDOUGALD L R. Anticoccidial activity of arprinocid and halofuginone [J]. Veterinary Parasitology, 1981, 9(1): 27−33. DOI: 10.1016/0304-4017(81)90004-2
[25] ZHANG D F, SUN B B, YUE Y Y, et al. Anticoccidial effect of halofuginone hydrobromide against Eimeria tenella with associated histology [J]. Parasitology Research, 2012, 111(2): 695−701. DOI: 10.1007/s00436-012-2889-7
[26] MO P H, MA Q T, ZHAO X, et al. Apoptotic effects of antimalarial artemisinin on the second generation merozoites of Eimeria tenella and parasitized host cells [J]. Veterinary Parasitology, 2014, 206(3/4): 297−303.
[27] 张世闯, 郭源辉, 刘婕, 等. 青蒿素及其衍生物的药物安全性研究进展与减毒对策分析 [J]. 世界科学技术-中医药现代化, 2023, 25(7):2549−2560. DOI: 10.11842/wst.20220513014 ZHANG S C, GUO Y H, LIU J, et al. Research progress on drug safety of artemisinin and its derivatives and analysis of its detoxification countermeasures [J]. Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology, 2023, 25(7): 2549−2560. (in Chinese) DOI: 10.11842/wst.20220513014
[28] 王谢雅聃, 刘树林. 常山的炮制历史沿革及现代研究进展 [J]. 中医药导报, 2023, 29(12):102−107. WANG X Y D, LIU S L. Historical evolution and modern research progress of Changshan processing [J]. Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy, 2023, 29(12): 102−107. (in Chinese)
[29] HUANG G P, TANG X L, BI F F, et al. Eimeria tenella infection perturbs the chicken gut microbiota from the onset of oocyst shedding [J]. Veterinary Parasitology, 2018, 258: 30−37. DOI: 10.1016/j.vetpar.2018.06.005
[30] QASEM M A A, DKHIL M A, AL-SHAEBI E M, et al. Rumex nervosus leaf extracts enhance the regulation of goblet cells and the inflammatory response during infection of chickens with Eimeria tenella [J]. Journal of King Saud University - Science, 2020, 32(3): 1818−1823. DOI: 10.1016/j.jksus.2020.01.024
[31] 孙颖, 赵旭, 夏新华, 等. 常山和常山碱的药理作用及减毒研究进展 [J]. 中国现代中药, 2022, 24(12):2514−2521. SUN Y, ZHAO X, XIA X H, et al. Pharmacological effects and attenuating toxicity of dichroae Radix and febrifugine: A review [J]. Modern Chinese Medicine, 2022, 24(12): 2514−2521. (in Chinese)
[32] 于东鑫. 一种新抗球虫中药组方及其与DVD联合用药对鸡球虫感染的疗效研究[D]. 洛阳: 河南科技大学, 2017. YU D X. A new anti-coccidiosis traditional Chinese medicine prescription and its therapeutic effect on chicken coccidiosis infection combined with DVD[D]. Luoyang: Henan University of Science and Technology, 2017. (in Chinese)
[33] 陈永亮, 刘丹丹, 汪飞燕. 青蒿素与二甲氧苄啶联合抗鸡球虫的试验研究 [J]. 家畜生态学报, 2020, 41(4):65−68. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1182.2020.04.012 CHEN Y L, LIU D D, WANG F Y. Research on artemisinin combining with DVD on chickens coccidiosis infected by etenella [J]. Journal of Domestic Animal Ecology, 2020, 41(4): 65−68. (in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1673-1182.2020.04.012
[34] 许佳, 许小青, 曹雪涛. IL-2受体信号转导及其功能研究进展 [J]. 中国免疫学杂志, 2014, 30(3):416−422. DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2014.03.028 XU J, XU X Q, CAO X T. Research progress of IL-2 receptor signal transduction and its function [J]. Chinese Journal of Immunology, 2014, 30(3): 416−422. (in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2014.03.028
[35] MANTIS N J, ROL N, CORTHÉSY B. Secretory IgA’s complex roles in immunity and mucosal homeostasis in the gut [J]. Mucosal Immunology, 2011, 4(6): 603−611. DOI: 10.1038/mi.2011.41
[36] SALERNO-GONCALVES R, SAFAVIE F, FASANO A, et al. Free and complexed-secretory immunoglobulin A triggers distinct intestinal epithelial cell responses [J]. Clinical and Experimental Immunology, 2016, 185(3): 338−347. DOI: 10.1111/cei.12801
[37] 郑世民, 胡京友, 刘晶, 等. 毒害艾美耳球虫初次感染雏鸡免疫器官IL-2和淋巴细胞增殖功能变化 [J]. 畜牧兽医学报, 2006, 37(11):1222−1225. DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2006.11.023 ZHENG S M, HU J Y, LIU J, et al. Changes of proliferative responses and interleukin-2 activity of lymphocytes in immune organs of chickens primary infected with E. Necatrix [J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2006, 37(11): 1222−1225. (in Chinese) DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2006.11.023
[38] 袁旭. 大型艾美尔球虫与肠艾美尔球虫感染对兔小肠黏膜屏障、抗氧化及粪便代谢物的影响[D]. 南昌: 江西农业大学, 2022. YUAN X. Effects of Eimeria maxima and Eimeria enterica infection on intestinal mucosal barrier, antioxidation and fecal metabolites in rabbits[D]. Nanchang: Jiangxi Agricultural University, 2022. (in Chinese)
[39] TAKAOKA Y, GOTO S, NAKANO T, et al. Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) prevents lipopolysaccharide (LPS)-induced, sepsis-related severe acute lung injury in mice [J]. Scientific Reports, 2014, 4: 5204. DOI: 10.1038/srep05204
[40] ROCKEL C, HARTUNG T. Systematic review of membrane components of gram-positive bacteria responsible as pyrogens for inducing human monocyte/macrophage cytokine release [J]. Frontiers in Pharmacology, 2012, 3: 56.
[41] 曾安琪, 华桦, 陈朝荣, 等. 金银花、山银花抗炎药理作用研究 [J]. 中国中药杂志, 2020, 45(16):3938−3944. ZENG A Q, HUA H, CHEN C R, et al. Comparative study on anti-inflammatory effect of Lonicerae Japonicae Flos and Lonicerae Flos [J]. China Journal of Chinese Materia Medica, 2020, 45(16): 3938−3944. (in Chinese)
[42] 潘虹, 舒丽, 侯杰, 等. 细胞因子在抗鸡球虫感染中的作用及应用 [J]. 中国畜牧兽医, 2011, 38(7):176−179. PAN H, SHU L, HOU J, et al. Role and application of cytokines against chicken coccidiosis [J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2011, 38(7): 176−179. (in Chinese)
[43] 郭晋丽, 赵志辉, 郭文博, 等. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对蛋鸡生产性能、血液指标和抗氧化能力的影响 [J]. 南京农业大学学报, 2018, 41(3):534−541. DOI: 10.7685/jnau.201708020 GUO J L, ZHAO Z H, GUO W B, et al. Effects of deoxynivalenol on performance, blood indices and antioxidant capacity in laying hens [J]. Journal of Nanjing Agricultural University, 2018, 41(3): 534−541. (in Chinese) DOI: 10.7685/jnau.201708020
[44] LILLEHOJ H S. Effects of immunosuppression on avian coccidiosis: Cyclosporin A but not hormonal bursectomy abrogates host protective immunity [J]. Infection and Immunity, 1987, 55(7): 1616−1621. DOI: 10.1128/iai.55.7.1616-1621.1987
[45] 张文飞, 管武太, 陈芳, 等. 青蒿素及其衍生物在畜禽生产中的应用研究进展 [J]. 饲料工业, 2019, 40(15):22−27. ZHANG W F, GUAN W T, CHEN F, et al. Advances in the application of Artemisinin and it’s derivatives in livestock and poultry production [J]. Feed Industry, 2019, 40(15): 22−27. (in Chinese)
-
期刊类型引用(2)
1. 魏全全，张萌，芶久兰，顾小凤，柳玲玲. 土壤调理剂用量对连作酒用高粱生长、黄壤养分及微生物的影响. 现代园艺. 2023(12): 4-7+26 . 
百度学术
2. 刘梦丹，胡思敏，王宗抗. 深汕特别合作区旱地土壤肥力状况调查与分析. 安徽农业科学. 2023(18): 74-77+81 . 百度学术
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