Embryo Rescue of Interspecific Brassica campestris x B. albograbra Hybrids
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摘要:目的 获得适合菜薹和芥蓝种间杂种的胚挽救实验方案。方法 以菜薹（菜心）作为母本，芥蓝作为父本，进行种间杂交，对种间杂种进行人工胚挽救培养，设置8种不同成分的胚挽救培养基，6个不同取材时间，4种增殖培养基，9种不同成分生根培养基。结果 ERM4（MS+6-BA 0.5 mg·L−1+NAA 0.5 mg·L−1+KT 1.0 mg·L−1+AC 1.0 g·L−1）出胚率达26.32%，为最佳胚挽救培养基；授粉后第12天取材，出胚率达26.32%，为最适宜取材时间；DM1（MS+6-BA 0.9 mg·L−1+NAA 0.1 mg·L−1）培养基增殖系数最大，为5.37，为最佳增殖培养基；RM4-2（1/2MS+IBA0.5 mg·L−1）培养基生根率为37.21%，平均生根时间为8.33 d，生根最快，为最佳生根培养基。结论 菜薹与芥蓝种间杂交，于授粉后12 d取材，胚珠接种在ERM4培养基上，出胚后接种在DM1培养基上增殖，在RM4-2培养基上生根，能够显著提高种间杂种的获得率。Abstract:Objective Methods suitable for embryo rescue in the interspecific hybridization between Brassica campestris and B. albograbra were investigated.Method The interspecific crossing was carried out using B. campestris L. as female parent and B. albograbra L. H. Bailey as male parent. An embryo rescue culture for the hybridization was conducted with 8 different media at 6 sampling times followed subsequently by 4 proliferation media and 9 rooting media.Result The embryo genesis rate at 26.32% of ERM4 medium consisting of MS, 0.5mg 6-BA·L−1, 0.5mg NAA·L−1, 1.0mg KT·L−1, and 1.0g AC·L−1 was the highest among all. The samples collected 12d after pollination had the best rate of 26.32%, DM1 (i.e., MS+ 0.9mg 6-BA·L−1+0.1mg NAA·L−1) the greatest proliferation coefficient of 5.37, and RM4-2 (i.e., 1/2MS+ 0.5mg IBA·L−1) the top rate of 37.21% and average 8.33d on rooting.Conclusion The optimum conditions for the embryo rescue in the interspecific hybridization between B. campestris L. and B. albograbra L. H. Bailey included sampling at 12d after pollination and following by culture on ERM4 medium for embryo induction, on DM1 for ovule proliferation, and on RM4-2 for seedling rooting.
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0. 引言
【研究意义】菜薹（俗称菜心，Brassica campestris L., AA, 2n=20），和芥蓝（Brassica albograbra L. H. Bailey, CC, 2n=18）均属十字花科芸薹属中不同种的重要薹用蔬菜。菜薹是由易抽薹白菜类蔬菜材料，经过长期选育而来的[1]。芥蓝在我国的栽培历史悠久，但是遗传育种的研究较为薄弱[2]，生产上推广应用的品种普遍存在产量低、品质差、病虫害严重等问题[3]。由于二者种质资源相对较少，遗传背景狭窄，单靠种内杂交，很难在现有基础上取得突破性进展。通过种间杂交，可以创制新品种，获得有用的育种材料。但二者存在杂交不亲和，不能得到后代，需采用人工胚挽救等方法才能获得菜薹和芥蓝种间杂交的后代。【前人研究进展】通过远缘杂交，可以创造新的杂种优势和新物种、新材料，但远缘杂交过程中存在诸多生殖障碍。邱德勃等[4]在芸薹属和萝卜属植物的远缘杂交中发现，胚乳在发育过程中解体，导致远缘杂种胚的败育，是受精后不亲和以及无法形成成熟种子的主要原因，Chrungu[5]研究发现，幼胚的离体培养是克服不亲和性的有效途径。梁红[6]对菜薹与甘蓝正反交，通过杂种胚离体培养，获得杂交优势显著的种间杂种。满红[7]以二倍体菜薹、四倍体菜薹、二倍体芥蓝、四倍体芥蓝为材料，经人工授粉杂交，通过子房培养和胚珠培养，创建了菜薹和芥蓝的种间异源四倍体和异源三倍体种质。乔海云[8]以菜薹和芥蓝为试验材料，运用蕾期授粉结合胚挽救技术获得菜薹与芥菜的种间杂种，为芸薹种和甘蓝种种质创新和遗传研究奠定基础。魏晓云等[9]采用二倍体菜薹和二倍体芥蓝杂交，筛选出亲和性较高的材料。【本研究切入点】前人的研究中虽已经获得菜薹和芥蓝的种间杂种，但对菜薹和芥蓝种间杂种胚挽救过程中，培养基成分、取材时间等细节进行筛选的研究有待深入进行。本试验通过对菜薹和芥蓝种间杂种胚挽救各个过程进行详细研究，以提高种间杂种的获得率。【拟解决的关键问题】通过设置不同的取材时间，不同生长调节剂配比，不同培养基成分，利用出胚率、增殖系数、生根率、生根时间等指标对各设定进行评估，筛选出最适合菜薹×芥蓝种间杂种胚挽救的实验方案，为菜薹和芥蓝育种种质的创制奠定基础。
1. 材料与方法
1.1 试验材料
供试材料菜薹CX20000和芥蓝JL20000均由云南省农业科学院园艺所十字花科课题组提供。
1.2 试验方法
1.2.1 种间杂交
试验材料于2020年6月1日播种，7月8日定植于云南省农业科学院十字花科课题实验基地塑料大棚内，常规栽培管理，菜薹于种间杂交。于杂交前2 d摘除父母本花序上已开放花朵，并套袋隔离，套袋父母本开花当天，对菜薹套袋分枝上未开放且未露柱头的花蕾进行剥蕾去雄，授以芥蓝套袋分枝上当日开放的花粉，配制CX20000×JL20000杂交组合，授粉后套袋隔离，严防父本以外的花粉污染。
1.2.2 不同培养方式
人工去雄授粉后，于适宜时间，取部分杂交后胚珠进行胚挽救培养，留取一部分在植株上继续生长，进行常规培养，比较两种方式的出胚率。
1.2.3 不同胚挽救培养基
大田授粉后，于授粉后第12天，选取有明显膨大胚珠的子房，用自来水冲洗2～3遍，于超净工作台内用75%酒精浸泡50 s，将酒精倒出后用10%次氯酸钠浸泡15 min，接着用无菌水冲洗3次，最后用无菌水浸泡3 min。用解剖刀沿子房腹缝线和背缝线处轻轻切开，用镊子挑取饱满且呈绿色的胚珠，分别接种到ERM1、ERM2、ERM3、ERM4、ERM5、ERM6、ERM7、ERM8培养基上（表1），每种培养基均设置3次重复，每次重复接种25～35个胚珠，接种后胚珠在温度（25±2） ℃、光照12 h·d−1、光照强度1 500 lx的条件下培养[8]。接种1周后进行观察，30 d后统计出胚率，筛选适合的胚挽救培养基。
表 1 菜薹×芥蓝种间杂种胚挽救培养基成分Table 1. Components in embryo rescue medium for interspecific B. campestris × B. albograbra hybrids编号
No.基本培养基
Minimal medium6-BA质量浓度
6-BA mass concentration/
（mg·L−1）NAA质量浓度
NAA mass concentration/
（mg·L−1）KT质量浓度
KT mass concentration/
（mg·L−1）AC含量
AC content/
（g·L−1）ERM1 MS 0.00 0.00 0.00 1.00 ERM2 MS 0.30 0.00 0.00 1.00 ERM3 MS 0.50 0.00 0.00 1.00 ERM4 MS 0.50 0.50 1.00 1.00 ERM5 MS 1.50 0.50 1.00 1.00 ERM6 MS 3.00 0.50 1.00 1.00 ERM7 MS 4.50 0.50 1.00 1.00 ERM8 MS 5.00 0.50 1.00 1.00 1.2.4 不同取材时间
大田授粉后，分别于授粉后10、11、12、13、14、15 d，选取有明显膨大胚珠的子房，消毒、灭菌后，挑取饱满且呈绿色的胚珠，接种到ERM4培养基上，每个取材时间设置3次重复，每次重复接种30～130个胚珠，接种后胚珠在温度（25±2）℃、光照12 h·d−1、光照强度1 500 lx的条件下培养1周后进行观察，30 d后统计出胚率，观察不同取材时间出胚率，筛选最适宜的取材时间。
1.2.5 不同增殖培养基
成活并成功分化的胚珠分别转移至DM1、DM2、DM3、DM4培养基上进行增殖分化（表2），每种培养基设置3次重复，每次重复接种25-27个不定芽，观察增殖情况，并统计各培养基的增殖系数，筛选适宜的增殖培养基。
表 2 菜薹×芥蓝种间杂种增殖培养基成分Table 2. Components in propagation medium for interspecific B. campestris × B. albograbra hybrids编号
No.基本培养基
Minimal
medium6-BA质量浓度
6-BA mass
concentration/
（mg·L−1）NAA质量浓度
NAA mass
concentration/
（mg·L−1）DM1 MS 0.90 0.10 DM2 1/2MS 0.90 0.10 DM3 MS 0.50 0.01 DM4 1/2MS 0.50 0.01 增殖系数=出芽数/原有芽数
1.2.6 不同生根培养基
胚珠在增殖培养基上分化至具有完整植株形态后，转接至1/2MS培养基上继续培养，长至3对真叶后，转移至生长素种类和质量浓度不同的RM培养基（表3），每种培养基设置3次重复，每次重复接种8～16株幼苗，观察统计各培养基的生根情况。根长适宜的幼苗定植于含育苗基质的苗钵后，在温度20～25 ℃，湿度80%条件下进行炼苗，待幼苗生长情况稳定后，移栽至红土∶过筛腐殖土=1∶1比例混合土内，常规肥水管理。定植后的杂种植株，统计其成活率。结合生根情况与幼苗成活率，筛选最适宜的生根培养基。
表 3 菜薹×芥蓝种间杂种生根培养基成分Table 3. Components in rooting medium for interspecific B. campestris × B. albograbra hybrids编号
No.基本培养基
Minimal
mediumNAA质量
浓度
NAA mass concentration/
（mg·L−1）IBA质量
浓度
IBA mass concentration/
（mg·L−1）IAA质量
浓度
IAA mass concentration/
（mg·L−1）RM1-1 MS 0.20 0.00 0.00 RM1-2 0.50 0.00 0.00 RM2-1 0.00 0.20 0.00 RM2-2 0.00 0.50 0.00 RM3-1 0.00 0.00 0.20 RM3-2 0.00 0.00 0.50 RM4-1 1/2MS 0.20 0.00 0.00 RM4-2 0.00 0.50 0.00 RM4-3 0.00 0.00 0.50 1.3 种间杂种形态学鉴定
成活后的杂种植株，在正当繁茂时观察其叶形、叶色、叶表面特征、花器官的颜色大小等方性状，并分别与菜薹和芥蓝两亲本进行比较，鉴定杂种的真实性。
1.4 数据分析
利用SPSS23.0软件对试验数据进行差异性分析。
2. 结果与分析
2.1 胚挽救和常规培养的比较
菜薹×芥蓝种间杂交后，在母本植株上自然生长进行常规培养，获得种子数为0，而胚挽救培养成功获得了种间杂种植株，证明菜薹×芥蓝种间杂交后代不结籽，需通过人工胚挽救培养，才能成功获得杂种。
2.2 不同培养基成分对出胚的影响
不同成分培养基出胚率如表4所示，共接种杂种胚珠730粒，出胚总数75粒，其中未添加生长调节剂的ERM1培养基上，未见胚珠萌发；ERM2和ERM3胚珠萌发率较低，分别为1.33%和2.56%，且差异不显著；ERM4培养基上出胚率显著高于其他培养基，为26.32%；ERM5、ERM6、ERM7、ERM8培养基随着添加的6-BA浓度逐渐增大，出胚率从18.18%逐渐降低至7.77%；因此ERM4（MS+6-BA 0.5 mg·L−1+ NAA 0.5 mg·L−1+KT 1.0 mg·L−1+AC 1.0 g·L−1）出胚率最高，为最佳胚挽救培养基。萌发后的杂种胚均生长良好，接种20 d后出胚情况、40 d后成苗情况、成活胚珠增殖情况均如图1所示。
表 4 菜薹×芥蓝杂种胚珠在不同培养基上出胚率Table 4. Embryogenesis rate of B. campestris × B. albograbra hybrid ovules on different media编号
No.胚珠培养数
Number of
ovules成胚数
Number of
embryogenesis出胚率
Embryogenesis
rate/%ERM1 105 0 0.00±0.00 f ERM2 75 1 1.33±0.02 ef ERM3 78 2 2.56±1.25 e ERM4 95 25 26.32±0.78 a ERM5 88 16 18.18±0.93 b ERM6 85 13 15.29±1.00 c ERM7 101 10 9.90±0.89 d ERM8 103 8 7.77±0.90 d 注：不同小写字母表示差异达0.05显著水平。下同。
Note: Different lowercase letters indicate significant difference at P<0.05. Same for the following.![]()
图 1 菜薹×芥蓝种间杂种胚挽救情况注：A，胚珠萌发；B，胚挽救幼苗；C，成活胚增殖分化Figure 1. Embryo rescue of interspecific B. campestris × B. albograbra hybridsNote: A: Ovule germination; B: embryo rescued seedling; C: proliferation and differentiation of survival embryos.2.3 不同取材时间对出胚的影响
如表5所示，不同取材时间的胚珠，在ERM4培养基上出胚率均存在差异，授粉后第10天取材，由于胚珠过小，依赖母体而离体培养很难成活，胚珠萌发率只有4.44%；授粉后第12天取材出胚率最高，为26.32%，且与其他取材时间相比差异显著；授粉12天以后取材，由于杂种胚逐渐败育，出胚率逐渐减小，第15天仅有3.33%。因此授粉后第12天为菜薹×芥蓝杂种胚最适宜的取材时间。
表 5 菜薹×芥蓝不同取材时间杂种胚珠出胚率Table 5. Embryogenesis rate of B. campestris × B. albograbra hybrid ovules with differed sampling time授粉后天数
Days after
pollination/d胚珠培养数
Number of
ovules出胚数
Number of
embryogenesis出胚率
Embryogenesis
rate/%10 90 4 4.44±1.93 b 11 88 9 10.23±1.97 b 12 95 25 26.32±2.77 a 13 382 40 10.47±0.92 b 14 150 10 6.67±3.34 b 15 60 2 3.33±2.89 c 2.4 不同增殖培养基的增殖效果
从表6可见，不同培养基增殖效果不同，增殖系数越大，增殖分化效果越好。DM1增殖系数为5.37，显著高于其他培养基；DM2和DM3增殖系数无显著差异，分别为4.02、4.15；DM4的增殖系数显著小于其他培养基，为2.90。因此DM1（MS+ 6-BA 0.9 mg·L−1+ NAA 0.1 mg·L−1）为菜薹×芥蓝种间杂种的最佳增殖培养基。
表 6 菜薹×芥蓝种间杂种成活胚珠在不同培养基上增殖分化情况Table 6. Proliferation and differentiation of viable ovules in B. campestris × B. albograbra hybrids on different media编号
No.原有芽数
Number of
original bud出芽数
Number of
budding增殖系数
Multiplication
coefficientDM1 79 424 5.37±0.05 a DM2 76 306 4.02±0.38 b DM3 80 332 4.15±0.25 b DM4 78 226 2.90±0.15 c 2.5 不同生根培养基对生根效果的影响
从表7可知，以不同基本培养基，添加不同种类和不同浓度生长素，生根效果均存在差异。生根率方面，最高的为RM4-1和RM1-1，分别为44.44%和40.74%，二者相比无显著差异，但显著高于其他培养基；其次是RM4-2，为37.21%，与RM1-1差异不显著。生根时间方面，RM4-2平均生根时间为8.33 d，生根最快，且与其他培养基平均生根时间差异显著。在不同培养基上成功生根后的幼苗，经炼苗、移栽后，均未出现死苗现象，幼苗移栽成活率为100%。
表 7 菜薹×芥蓝种间杂种不同培养基生根情况Table 7. Rooting of interspecific B. campestris × B. albograbra hybrids on different media编号
No.培养幼苗数
Number of
cultured seedlings生根幼苗数
Number of
rooting seedlings生根率
Rate of
rooting/%平均生根时间
Mean rooting
time/d移栽后成活幼苗
Number of survived
seedlings after
transplanting移栽成活率
Rate of
transplanting
survival/%RM1-1 27 11 40.74±2.20 ab 11.00±1.00 b 11 100 RM1-2 28 4 14.29±3.07 e 11.33±0.58 b 4 100 RM2-1 24 6 25.00±3.13 cd 8.67±0.58 b 6 100 RM2-2 25 9 36.00±2.57 bc 8.67±0.58 b 9 100 RM3-1 27 5 18.52±3.03 d 14.33±1.53 a 5 100 RM3-2 27 7 25.93±2.75 c 15.00±1.00 a 7 100 RM4-1 45 20 44.44±1.93 a 11.33±0.58 b 20 100 RM4-2 43 16 37.21±1.47 cd 8.33±0.58 c 16 100 RM4-3 47 13 27.66±1.54 c 14.67±1.53 a 13 100 从图2可知，添加不同种类生长素，诱导的根形态也存在差异，添加NAA培养基，幼苗生长的根，表现为短且粗壮、无须根，添加IBA和IAA诱导的根，表现为细长。以MS培养基为基本培养基时，各培养基均出现部分苗产生盐害的现象（图3），盐害苗叶片部分黄化且逐渐脱落，将MS培养基更换为1/2MS培养基时，这一现象得到缓解（图4）。综上所述，幼苗移栽成活率未受不同生根培养基影响，RM4-1、RM1-1和RM4-2的生根率较高，RM4-1和RM4-2培养基上生长的幼苗质量较高，RM4-2生根时间最短，生根最快，适用于组培苗的快速繁殖，因此RM4-2（1/2MS+IBA 0.5 mg·L−1）为菜薹×芥蓝种间杂种胚挽救幼苗的最佳生根培养基。
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图 2 菜薹×芥蓝种间杂种生根过程不同生长素生长果注：A：NAA生根效果；B：IBA生根效果；C：IAA生根效果；D：未加激素MS培养基生根效果Figure 2. Effects of auxins on growth during rooting of interspecific B. campestris × B. albograbra hybridsNote: A: Rooting affected by NAA; B: rooting affected by IBA; C: rooting affected by IAA; D: seedling rooting on MS without hormone addition.![]()
图 3 菜薹×芥蓝种间杂种生根过程盐害现象Figure 3. Damage induced by salt at rooting stage of interspecific B. campestris × B. albograbra hybrids![]()
图 4 菜薹×芥蓝种间杂种生根过程Figure 4. Rooting of interspecific B. campestris × B. albograbra hybrids2.6 种间杂种形态学表现
对菜薹×芥蓝种间杂种进行形态学观察并与菜薹和芥蓝各性状进行比较。以菜薹作为母本的种间杂种植株，植株形态如图5所示，主薹表面有棱，叶片形状为长卵圆，叶片颜色为深绿，与母本菜薹更为接近，主薹的颜色为浅绿，且有少量蜡粉，与父本芥蓝更为接近。杂种植株花器官形态如图6所示，花朵颜色与父本相同，为白色，花朵大小介于父母本之间。综合上述形态学表现，初步判断所得植株为菜薹和芥蓝种间杂交所得真杂种。
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图 5 菜薹×芥蓝种间杂种植株形态注：A，菜薹；B、C，种间杂种；D，芥蓝Figure 5. Morphology of interspecific B. campestris × B. albograbra hybrid plantNote：A: B. campestris; B and C: interspecific hybrid; D: B. albograbra.![]()
图 6 菜薹×芥蓝种间杂种花器官形态注：A：F菜薹；B：E种间杂种；C：D芥蓝Figure 6. Morphology of floral organ of interspecific B. campestris × B. albograbra hybridNote: A and F: B. campestris; B and E: interspecific hybrid; C and D: B. albograbra.3. 讨论与结论
影响杂交亲和性的因素主要包括杂交组合方式和亲本的基因型[10]，而亲缘关系越近的两种植物杂交，越容易获得成功[11]。刘爱华[12]、栗茂腾[13]、李宗芸[14]、宋运淳[15]等学者的研究结果都表明芸薹属A和C基因组较A和B以及B和C之间亲缘关系较近，本试验进行远缘杂交的两亲本作物菜薹和芥蓝，分别为芸薹属A组和C组染色体中的重要薹用蔬菜，成功获得了菜薹×芥蓝的种间杂种。李明山[16]、张国庆[17]等学者的研究结果表明，胚挽救技术能够克服杂交的不亲和性，本试验中进行的种间杂交常规培养无法获得种子，采用胚挽救技术获得了杂交种，证明胚挽救技术能克服杂交不亲和性的困难。
受父母本基因型的影响，授粉后的不同时间胚珠发育程度不同，谭亚飞[18]利用白菜型油菜黄籽沙逊和芥蓝进行种间杂交，胚挽救实验结果表明授粉后第11天为最佳取材时间，出胚率最高。而本试验中，受母本菜薹影响，最佳取材时间为授粉后第12天。Harberd[19]在甘蓝×白菜的杂交研究中发现，取材时间和培养基种类都会影响胚挽救技术的结果。满红[7]对四倍体菜薹和四倍体芥蓝的种间杂种进行子房培养，最佳的取材时间为授粉后7 d，得胚率为1.53个胚珠/子房。本试验中授粉后10~15 d取材，进行胚珠培养，每个取材时间的出胚率各不相同，且授粉后第12天出胚率最高，为26.32%，而菜薹×芥蓝的胚珠，在5种不同的培养基上萌发情况也不同，以ERM4培养基（MS+6-BA 0.5 mg·L−1+ NAA 0.5 mg·L−1+KT 1.0 mg·L−1+AC 1.0 g·L−1）萌发率最好，出胚率为26.32%，显著高于其他培养基。
植物根系的形成与诸多因素有关，植物生长调节剂起着关键作用[20]，当生长调节剂浓度高于细胞分裂素时，有利于不定根的诱导。本试验中在1/2MS和MS中分别添加不同浓度的NAA、 IBA和IAA，试验数据表明，以RM4-1（1/2MS+NAA 0.2 mg·L−1）生根率最高，高于添加IBA和IAA的培养基。这一结果与张以忠[21]的 IAA与IBA诱导荞麦生根的效应好于NAA有差异，但与王健省[22]的NAA对双瓣茉莉水培扦插生根的效果明显优于IAA一致，据吴大忠[23]的研究结果表明，不同的无性系生根所需的生长调节剂种类和浓度存在较大的差异，可能是不同植物诱导生根适宜的生长调节剂种类不同。另外，本试验通过添加不同浓度生长调节剂诱导生根发现，RM4-2（1/2MS+IBA 0.5 mg·L−1）诱导生根最快，适宜进行快繁，实际应用中应根据具体需求，选择适宜的生根培养基成分。
本研究筛选出了适宜菜薹和芥蓝种间杂种的胚挽救实验方案，为种间杂种的选育奠定了基础。但通过此试验获得的杂交种为异源二倍体，减数分裂时染色体无法正常联会配对，从而无法形成配子，不具有育性，要得到能正常繁殖的杂交种，还需进行人工加倍等试验，克服种间杂种的不育性，选育出具有杂种优势的种间杂种。
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图 1 菜薹×芥蓝种间杂种胚挽救情况
注：A，胚珠萌发；B，胚挽救幼苗；C，成活胚增殖分化
Figure 1. Embryo rescue of interspecific B. campestris × B. albograbra hybrids
Note: A: Ovule germination; B: embryo rescued seedling; C: proliferation and differentiation of survival embryos.
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图 2 菜薹×芥蓝种间杂种生根过程不同生长素生长果
注：A：NAA生根效果；B：IBA生根效果；C：IAA生根效果；D：未加激素MS培养基生根效果
Figure 2. Effects of auxins on growth during rooting of interspecific B. campestris × B. albograbra hybrids
Note: A: Rooting affected by NAA; B: rooting affected by IBA; C: rooting affected by IAA; D: seedling rooting on MS without hormone addition.
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图 3 菜薹×芥蓝种间杂种生根过程盐害现象
Figure 3. Damage induced by salt at rooting stage of interspecific B. campestris × B. albograbra hybrids
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图 4 菜薹×芥蓝种间杂种生根过程
Figure 4. Rooting of interspecific B. campestris × B. albograbra hybrids
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图 5 菜薹×芥蓝种间杂种植株形态
注：A，菜薹；B、C，种间杂种；D，芥蓝
Figure 5. Morphology of interspecific B. campestris × B. albograbra hybrid plant
Note：A: B. campestris; B and C: interspecific hybrid; D: B. albograbra.
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图 6 菜薹×芥蓝种间杂种花器官形态
注：A：F菜薹；B：E种间杂种；C：D芥蓝
Figure 6. Morphology of floral organ of interspecific B. campestris × B. albograbra hybrid
Note: A and F: B. campestris; B and E: interspecific hybrid; C and D: B. albograbra.
表 1 菜薹×芥蓝种间杂种胚挽救培养基成分
Table 1 Components in embryo rescue medium for interspecific B. campestris × B. albograbra hybrids
编号
No.基本培养基
Minimal medium6-BA质量浓度
6-BA mass concentration/
（mg·L−1）NAA质量浓度
NAA mass concentration/
（mg·L−1）KT质量浓度
KT mass concentration/
（mg·L−1）AC含量
AC content/
（g·L−1）ERM1 MS 0.00 0.00 0.00 1.00 ERM2 MS 0.30 0.00 0.00 1.00 ERM3 MS 0.50 0.00 0.00 1.00 ERM4 MS 0.50 0.50 1.00 1.00 ERM5 MS 1.50 0.50 1.00 1.00 ERM6 MS 3.00 0.50 1.00 1.00 ERM7 MS 4.50 0.50 1.00 1.00 ERM8 MS 5.00 0.50 1.00 1.00 
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表 2 菜薹×芥蓝种间杂种增殖培养基成分
Table 2 Components in propagation medium for interspecific B. campestris × B. albograbra hybrids
编号
No.基本培养基
Minimal
medium6-BA质量浓度
6-BA mass
concentration/
（mg·L−1）NAA质量浓度
NAA mass
concentration/
（mg·L−1）DM1 MS 0.90 0.10 DM2 1/2MS 0.90 0.10 DM3 MS 0.50 0.01 DM4 1/2MS 0.50 0.01
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表 3 菜薹×芥蓝种间杂种生根培养基成分
Table 3 Components in rooting medium for interspecific B. campestris × B. albograbra hybrids
编号
No.基本培养基
Minimal
mediumNAA质量
浓度
NAA mass concentration/
（mg·L−1）IBA质量
浓度
IBA mass concentration/
（mg·L−1）IAA质量
浓度
IAA mass concentration/
（mg·L−1）RM1-1 MS 0.20 0.00 0.00 RM1-2 0.50 0.00 0.00 RM2-1 0.00 0.20 0.00 RM2-2 0.00 0.50 0.00 RM3-1 0.00 0.00 0.20 RM3-2 0.00 0.00 0.50 RM4-1 1/2MS 0.20 0.00 0.00 RM4-2 0.00 0.50 0.00 RM4-3 0.00 0.00 0.50
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表 4 菜薹×芥蓝杂种胚珠在不同培养基上出胚率
Table 4 Embryogenesis rate of B. campestris × B. albograbra hybrid ovules on different media
编号
No.胚珠培养数
Number of
ovules成胚数
Number of
embryogenesis出胚率
Embryogenesis
rate/%ERM1 105 0 0.00±0.00 f ERM2 75 1 1.33±0.02 ef ERM3 78 2 2.56±1.25 e ERM4 95 25 26.32±0.78 a ERM5 88 16 18.18±0.93 b ERM6 85 13 15.29±1.00 c ERM7 101 10 9.90±0.89 d ERM8 103 8 7.77±0.90 d 注：不同小写字母表示差异达0.05显著水平。下同。
Note: Different lowercase letters indicate significant difference at P<0.05. Same for the following.
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表 5 菜薹×芥蓝不同取材时间杂种胚珠出胚率
Table 5 Embryogenesis rate of B. campestris × B. albograbra hybrid ovules with differed sampling time
授粉后天数
Days after
pollination/d胚珠培养数
Number of
ovules出胚数
Number of
embryogenesis出胚率
Embryogenesis
rate/%10 90 4 4.44±1.93 b 11 88 9 10.23±1.97 b 12 95 25 26.32±2.77 a 13 382 40 10.47±0.92 b 14 150 10 6.67±3.34 b 15 60 2 3.33±2.89 c
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表 6 菜薹×芥蓝种间杂种成活胚珠在不同培养基上增殖分化情况
Table 6 Proliferation and differentiation of viable ovules in B. campestris × B. albograbra hybrids on different media
编号
No.原有芽数
Number of
original bud出芽数
Number of
budding增殖系数
Multiplication
coefficientDM1 79 424 5.37±0.05 a DM2 76 306 4.02±0.38 b DM3 80 332 4.15±0.25 b DM4 78 226 2.90±0.15 c
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表 7 菜薹×芥蓝种间杂种不同培养基生根情况
Table 7 Rooting of interspecific B. campestris × B. albograbra hybrids on different media
编号
No.培养幼苗数
Number of
cultured seedlings生根幼苗数
Number of
rooting seedlings生根率
Rate of
rooting/%平均生根时间
Mean rooting
time/d移栽后成活幼苗
Number of survived
seedlings after
transplanting移栽成活率
Rate of
transplanting
survival/%RM1-1 27 11 40.74±2.20 ab 11.00±1.00 b 11 100 RM1-2 28 4 14.29±3.07 e 11.33±0.58 b 4 100 RM2-1 24 6 25.00±3.13 cd 8.67±0.58 b 6 100 RM2-2 25 9 36.00±2.57 bc 8.67±0.58 b 9 100 RM3-1 27 5 18.52±3.03 d 14.33±1.53 a 5 100 RM3-2 27 7 25.93±2.75 c 15.00±1.00 a 7 100 RM4-1 45 20 44.44±1.93 a 11.33±0.58 b 20 100 RM4-2 43 16 37.21±1.47 cd 8.33±0.58 c 16 100 RM4-3 47 13 27.66±1.54 c 14.67±1.53 a 13 100
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