2. 福建省宁化县畜牧兽医水产局, 福建 宁化 365400
2. Ninghua County Bureau of Animal Husbandry and Aquiculture, Ninghua, Fujian 365400, China
球虫病是山羊的常见病和多发病,在临床上常表现为腹泻、消瘦、贫血、生长发育缓慢以及生产性能低下等症状,严重时(特别在羔羊阶段)可导致发病死亡,给山羊养殖业造成较大的经济损失[1]。我国地域辽阔,不同地区、不同山羊品种、不同饲养模式以及不同日龄山羊球虫的感染率、感染强度以及球虫的种类也不尽相同。从已发表的文献来看[2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12],全国各地的山羊球虫感染率都比较高,不同饲养模式条件下山羊球虫感染率差异较大。山羊球虫多为隐性感染,其对山羊养殖的危害性还不引起养殖户的足够重视。近年来福建省肉羊养殖业方兴未艾,呈现许多放牧或舍饲等多种饲养模式。为充分掌握福建省不同饲养模式条件下山羊球虫感染情况,于2015年1月至2015年6月对福建省内25个不同饲养模式山羊场(放牧饲养20个、舍饲圈养5个)随机取样750头山羊粪样进行山羊球虫感染率、感染强度以及球虫种类调查,以期为福建省山羊球虫病的防控提供依据。
1 材料和方法 1.1 试验材料随机采集福建省内5个地区(福州市、宁德市、南平市、三明市、泉州市)共计750份粪样,其中20个放牧山羊场(规模50~500头,品种有福清山羊、闽东山羊、南江黄羊及本地山羊)粪样600份,分为 6月龄内羔羊、7~18月龄中大羊、种羊3个日龄段进行分类采集,每个日龄段粪样共200份,平均每个放牧场各日龄段粪样各10份;5个舍饲圈养场(规模50~1 000头,品种有奶山羊、湖羊、本地山羊)粪样150头份,同样分为6月龄内羔羊、7~18月龄中大羊、种羊3个日龄段进行分类采集,每个日龄段粪样共50份,平均每个圈养场各日龄段粪样各10份。要求每份粪便10 g左右,置于干净的塑料袋中,编号并记录山羊的饲养模式、日龄和品种等项目,保存于4~8℃保温箱中及时检查。采集的粪样以新鲜、球状干粪为主,对于少数半成形、软湿形、粥状或水样粪样,其结果要相应的乘以1.5、2、3、4等粪便性状系数[13]。
1.2 试验方法 1.2.1 卵囊收集和计数采用麦克马斯特氏计数法进行集卵和计数[14]。取2 g粪便放入装有玻璃珠的小瓶内,加入饱和生理盐水58 mL,充分振荡混合后,经60目钢丝筛过滤后,边摇晃边用吸管吸出少量过滤液滴入2个麦氏计数室内,并置于显微镜下,静置几分钟后,用中倍镜(10×10)将2个计数室计数格内见到的球虫卵囊全部计数完,取2个计数室内卵囊数量的平均值,再×200即为该样品中每克粪便的卵囊数(EPG)。根据卵囊数量多少把阳性粪便分为轻度感染(EPG<1×104)、中度感染(1×104 ≤EPG<10×104)、严重感染(EPG≥10×104)来评价山羊球虫感染强度[15]。
1.2.2 卵囊分离和培养参照刘光辉[16]等方法进行山羊球虫卵囊的收集和培养,观察时间持续7 d,每天观察2次。
1.2.3 卵囊种类鉴定每次在光学显微镜下对培养物进行观察,重点观察卵囊是否出现孢子化以及孢子化卵囊的形态、极帽、卵膜孔、孔下皱褶、内残体、外残体、斯氏体、极粒等项目,计算孢子化时间,并测量20~30个孢子化卵囊的大小。最后参考相关文献[2, 3, 4, 17, 18],进行山羊球虫种类的鉴定,并绘制球虫卵囊的形态结构图[19]。
1.3 数据处理试验数据采用SPSS 13.0软件进行统计分析,采用ANOVA进行方差分析。
2 结果与分析 2.1 不同饲养模式条件下山羊球虫感染率和感染强度调查结果从表 1看出,20个放牧饲养场600份粪样中,6月龄内羔羊组200份粪样中均检出山羊球虫,球虫检出率为100%,其中轻度感染数为61份(占30.5%),中度感染数为121份(占60.5%),重度感染数为18份(占9%)。7~18月龄中大羊组200份粪样中检出球虫177份,球虫检出率为88.5%,其中轻度感染数为128份(占64.0%),中度感染数为47份(占23.5%),重度感染数为2份(占1%)。种羊组200份粪样中检出球虫168份,球虫检出率为84.0%,其中轻度感染数为146份(占73.0%),中度感染数为22份(占11%),没有发现严重感染。6月龄内羔羊组与中大羊组、种羊组球虫的感染率(检出率)差异均极显著(P<0.01),中大羊组和种羊组球虫的感染率(检出率)差异不显著(P>0.05);羔羊组的中重度感染数为139份(占69.5%),中大羊的中重度感染数为49份(占24.5%),种羊的中重度感染数为22份(占11%),羔羊组中重度感染率极显著高于中大羊组和种羊组,说明羔羊组的山羊球虫感染程度明显比中大羊组、种羊组严重。
从表 2看出,5个舍饲圈养场150头份粪样中,6月龄内羔羊组50份粪样中检出球虫34份,球虫检出率为68.0%,其中轻度感染数为23份(占46.0%),中度感染数为11份(占22.0%),没有重度感染。7~18月龄中大羊组50份粪样中检出球虫25份,球虫检出率为50.0%,其中轻度感染数为21份(占42.0%),中度感染数为4份(占8.0%),没有重度感染。种羊组50份粪样中检出球虫22份,球虫检出率为44%,其中轻度感染数为21份(占42.0%),中度感染数为1份(占2%),没有发现严重感染。6月龄内羔羊组与种羊组球虫的感染率(检出率)差异显著(P<0.05),其他组间球虫的感染率(检出率)差异不显著(P>0.05);不同日龄山羊之间的山羊球虫感染强度没有明显差异。
在放牧饲养条件下检出的山羊球虫种类有10种,分别是小型艾美耳球虫Eimeria..parva、艾丽艾美耳球虫E.alijevi、尼氏艾美耳球虫E.ninakohlya、家山羊艾美耳球虫E.hirei、山羊艾美耳球虫E.caprina、羊艾美耳球虫E.caprovina、阿洛艾美耳球虫E.arlongi、阿普艾美耳球虫E.apsheronica、约奇艾美耳球虫E.jolchijevi、柯氏艾美耳球虫E.christenseni,见形态图 1。
(1)小型艾美耳球虫 卵囊呈球形或亚球形,属小型球虫,大小为(11~19)μm×(11~18)μm,平均15.5 μm×15.0 μm,形状指数为1.03,无极帽,无卵膜孔,有极粒,无外残体,孢子囊呈长卵圆形,有内残体,子孢子内含1个折光体,孢子化时间为36 h。
(2)艾丽艾美耳球虫 卵囊呈球形或亚球形,属小型球虫,大小为(13.5~22.5)μm×(12.5~21.5)μm,平均17.5 μm×17.2 μm,形状指数为1.02,无极帽,无卵膜孔,有极粒,无外残体,孢子囊呈长卵圆形,有内残体和斯氏体,子孢子头尾相邻纵列于孢子囊内,孢子化时间为132 h。
(3)尼氏艾美耳球虫 卵囊呈椭圆形或亚球形,属中小型球虫,大小为(19~27)μm×(16~23)μm,平均22.8 μm×20.2 μm,形状指数为1.13,无极帽,卵膜孔较小,孔下有皱褶,有极粒1个或数个,无外残体,孢子囊呈卵圆形,有内残体和斯氏体,孢子化时间为60 h。
(4)家山羊艾美耳球虫 卵囊呈宽椭圆形或亚球形,属中小型球虫,大小为(17~28)μm×(15~23)μm,平均23.9μm×20.1μm,形状指数为1.19,极帽呈圆拱形,有卵膜孔,孔下无皱褶,有极粒1个或数个,无外残体,孢子囊呈宽卵圆形,有内残体及较小的斯氏体,子孢子内有2个折光体,孢子化时间为72 h。
(5)山羊艾美耳球虫 卵囊呈宽椭圆形,属中型球虫,大小为(26~34)μm×(19~28)μm,平均29.5μm×22.8 μm,形状指数1.3,无极帽,卵膜孔明显且较宽平,孔下有皱褶,有极粒,无外残体,孢子囊呈卵圆形,有内残体、由细小颗粒组成,有斯氏体,子孢子内含2个折光体,孢子化时间为60 h。
(6)羊艾美耳球虫 卵囊呈宽椭圆形或亚球形,属中型球虫,大小为(25.0~35.5)μm×(19.0~26.5)μm,平均29.5μm×24.1 μm,形状指数为1.23,无极帽,有卵膜孔,孔下无皱褶,有1个或数个极粒,无外残体,孢子囊呈卵圆形,有内残体和斯氏体,子孢子头尾相邻纵列于孢子囊中内,内含1个折光体,孢子化时间为72 h。
(7)阿洛艾美耳球虫 卵囊呈椭圆形或稍卵圆形,属中大型球虫,大小为(25~36)μm×(20~27)μm,平均31.4μm×22.6 μm,形状指数为1.4,极帽较明显,呈圆拱形,有卵膜孔,孔下有皱褶,有1个或数个极粒,无外残体,孢子囊呈长椭圆形,有内残体和斯氏体,子孢子头尾相对,沿孢子囊长轴左右并列,内含2个折光体,孢子化时间为36 h。
(8)阿普艾美耳球虫 卵囊呈卵圆形,上端较窄,属中大型球虫,大小为(27~36)μm×(23~29.5)μm,平均32.4μm×24.5 μm,形状指数为1.3,无极帽,卵膜孔位于卵囊窄端,孔径较小,孔下有皱褶,无外残体,有极粒1个或数个。孢子囊呈长卵圆形,有内残体(呈条索状)和斯氏体,子孢子内含1~2个折光体,孢子化时间为60 h。
(9)约奇艾美耳球虫 卵囊呈宽肩罐状,上宽下窄,属中大型球虫,大小为(30.5~42.5)μm×(23~31)μm,平均33.5μm×25.6 μm,形状指数为1.3,极帽宽而明显,有卵膜孔,孔下无皱褶,无外残体,有极粒1个或数个。孢子囊呈卵圆形,有内残体(呈团块状)和斯氏体,2个子孢子头尾相对、沿孢子囊长轴左右并列,每个子孢子内含2个折光体,孢子化时间为120 h。
(10)柯氏艾美耳球虫 卵囊呈卵圆形,属大型球虫,大小为(32~45)μm×(23~33)μm,平均40.8μm×27.1 μm,形状指数为1.5,极帽明显,呈丘形,有卵膜孔,孔下有皱褶,无外残体,有极粒。孢子囊呈宽卵圆形,有内残体和斯氏体,子孢子沿孢子囊长轴左右并列,子孢子内含1个折光体,孢子化时间为60 h。
2.2.2 舍饲圈养条件下山羊球虫种类在舍饲圈养条件下检出的山羊球虫种类有7种,分别是小型艾美耳球虫、尼氏艾美耳球虫、家山羊艾美耳球虫、山羊艾美耳球虫、阿洛艾美耳球虫、阿普艾美耳球虫、柯氏艾美耳球虫。上述7种球虫的形态结构及大小与放牧饲养条件下检出的球虫类似。
3 讨论与结论本次调查福建省内20个放牧饲养场共计600份粪样,球虫的感染率普遍较高,平均为90.8%,且山羊的日龄越小,球虫的感染率相对越高。从感染强度来看,6月龄内羔羊中重度感染数为139份(占69.5%),7~18月龄中大羊的中重度感染数为49份(占24.5%),种羊的中重度感染数为22份(占11.0%),羔羊组与中大羊组、种羊组的中重度感染率差异极显著(P<0.01),表明球虫对6月龄内羔羊的危害性比较大。这一调查结果与国内多数学者的报道相一致[2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9]。调查5个舍内圈养场150份粪样,球虫的感染率平均为54.0%,也呈现日龄越小,球虫的感染率越高的趋势。从感染强度来看,6月龄内羔羊中重度感染数为11份(占22.0%),7~18月龄中大羊的中重度感染数为4份(占8%),种羊的中重度感染数为1份(占2.0%),3组的感染强度都不大,3组之间中重度感染率差异也不显著(P>0.05),这一结果与陶立、李培英等报道的不一致[10, 11, 12]。球虫在成年羊多为隐性感染,很少单独表现临床症状;而在羔羊球虫感染率高、感染强度大,在临床上除了表现腹泻外,还有软脚、衰竭死亡症状,死亡率可达20%~50%,这在许多山羊场还没有引起高度重视。造成羔羊出现球虫的高感染率和高死亡率的原因,除了与其自身抵抗力差、肠道黏膜上皮细胞脆弱有关外,还与母羊隐性带虫以及哺乳期饲养管理不良有关。造成放牧山羊球虫感染率高、感染强度相对较大的原因是放牧山羊在野外放牧过程中容易直接接触到土壤或污染场所的球虫卵囊,而舍内圈养多采用离地漏粪网上饲养,卫生条件相对较好,山羊不易接触到球虫的卵囊或孢子化卵囊,所以圈养山羊的球虫感染率和感染强度要比放牧饲养低得多。
迄今为止,国内已报道的羊球虫种类有28种[20],其中寄生在山羊体内的就有19种,分别是阿洛艾美耳球虫E.arlongi、阿普艾美耳球虫E.apsheronica、阿撒他艾美耳球虫E.ahsata、艾丽艾美耳球虫E.alijevi、斑点艾美耳球虫E.puntata、苍白艾美耳球虫E.pallida、槌形艾美耳球虫E.crandallis、错乱艾美耳球虫E.intricata、福氏艾美耳球虫E.faurei、家山羊艾美耳球虫E.hirei、柯恰尔艾美耳球虫E.kocharli、柯氏艾美耳球虫E.christenseni、颗粒艾美耳球虫E.granulosa、马尔西卡艾美耳球虫E.marsica、尼氏艾美耳球虫E.ninakohlya、山羊艾美耳球虫E.caprina、小型艾美耳球虫E.parva、羊艾美耳球虫E.caprovina、约奇艾美耳球虫E.jolchijevi等。其中某些球虫种类有可能存在同物异名或同物多名情况[1, 8, 20]。本试验中放牧羊群共检出10种山羊球虫,分别是小型艾美耳球虫、艾丽艾美耳球虫、尼氏艾美耳球虫、家山羊艾美耳球虫、山羊艾美耳球虫、羊艾美耳球虫、阿洛艾美耳球虫、阿普艾美耳球虫、约奇艾美耳球虫、柯氏艾美耳球虫。其中比较常见的有阿洛艾美耳球虫、家山羊艾美耳球虫、山羊艾美耳球虫、柯氏艾美耳球虫、尼氏艾美耳球虫、小型艾美耳球虫等,并多呈2~4种混合感染,这些虫种应该是福建省山羊球虫的优势虫种,至于每一种类的检出数量、比例有待进一步分类统计。舍饲圈养共检出7种山羊球虫,种类比放牧羊群少,分析原因一方面与舍饲圈养球虫总体感染率低有关,另一方面与舍饲圈养所采集的粪样少也有关。
在临床上,球虫病是山羊的常见病、多发病,山羊球虫对6月龄内的羔羊危害性较大,会引起体质消瘦、食欲不振,个别严重的可导致腹泻拉稀,最后衰竭而死亡,而对成年羊多以隐性感染为主。要防控好山羊的球虫病首先要改变饲养模式,多提倡网上或架上圈养,其中网眼或架子空隙要大些,以便于漏粪和卫生清洁;其次要把羔羊与母羊或其他成年羊只分开饲养,避免球虫卵囊的交叉感染;第三,要保证舍内卫生清洁和干燥,场所的清洁和干燥不利于球虫卵囊的孢子化;第四,要做好山羊有关肠道蠕虫的驱虫工作(如食道口线虫、捻转血矛线虫、莫尼茨绦虫等),以减少羊只因肠道蠕虫感染而继发感染山羊球虫病。
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