双孢蘑菇不同交配型同核不育单孢的基因组文库构建

蔡志欣; 陈美元; 廖剑华; 李洪荣; 郭仲杰; 王泽生

doi:10.19303/j.issn.1008-0384.2017.012.010

双孢蘑菇不同交配型同核不育单孢的基因组文库构建

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.012.010

福建省农业科学院食用菌研究所/特色食用菌繁育与栽培国家地方联合工程研究中心, 福建福州 350014

基金项目:

福建省科技计划项目—省属公益类科研院所基本科研专项 2015R1020-1

国家现代农业产业技术体系建设专项 CARS20

福建省财政专项—福建省农业科学院科技创新团队建设项目 STIT2017-1-6

福建省种业创新产业化工程项目 fjzycxny2017009

详细信息

作者简介:
蔡志欣(1983-), 男, 硕士, 助理研究员, 主要从事食用菌遗传育种研究(E-mail:181351945@qq.com)

通讯作者:
陈美元(1972-), 男, 博士, 教授级高工, 主要从事食用菌遗传育种研究(E-mail:cmy1972@gmail.com)

中图分类号: S646.1
计量
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出版历程
- 收稿日期: 2017-10-11
- 修回日期: 2017-12-20
- 刊出日期: 2017-12-28

Genomic Library Construction of Monokaryons with Different Mating Type of Agaricus bisporus

Institute of Edible Fungi, Fujian Academy of Agricultural Sciences/National and Local Joint Engineering Research Center for Breeding & Cultivation of Featured Edible Fungi, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou, Fujian 350014, China

摘要

摘要: 对24个双孢蘑菇不育单孢进行两两杂交配对, 以菌株9608为基准, 获得了2种不同交配型的不育单孢菌株A+:9601、9608、9609、9612、AgQG841-1、AgLH830-4、AgLH830-6、AgQL8125-5;A-:9602、9603、9604、9607、Ag2k811-1、M7206-1、M7206-2、M7206-11、M7206-13。将这2种菌株进行DNA提取, 并构建DNA文库, 对文库进行酶切验证, 用SalⅠ酶切, 可切出20、14、9 kb等3个片段, 其中20、9 kb为λ载体的左右臂, 插入片段为14 kb, 与预期相符, 说明文库的质量较高。
- 双孢蘑菇 /
- 不育单孢 /
- 交配型因子 /
- 基因组文库
Abstract: In this study, twenty-two Agaricus bisporus monokaryons strains were pairwisely paired.Based on strain 9608, two different mating types of monokaryons were obtained.A + strains:9601, 9608, 9609, 9612, AgQG841-1, AgLH830-4, AgLH830-6, AgQL8125-5.A-:9602, 9603, 9604, 9607, Ag2k811-1, M7206-1, M7206-2, M7206-11, M7206-13.The genomic DNA of two strains were extracted and DNA library were constructed.The library was verified by restriction enzyme digestion with SalⅠ.The 20 kb, 14 kb and 9 kb 3 fragments were cut out, of which 20 kb and 9 kb were the inserted into the left and right arms of lambda vector and the fragment of 14kb, was the insertion genomic DNA fragments.Enzyme digestion result was in line with expectations, indicating the higher quality of the library.
- Agaricus bisporus /
- monokaryons /
- mating type factor /
- genomic library

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图 1 As2796分离的同核不育株

Figure 1. Monokaryons obtained from As2796

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图 2 AgQL8125分离的同核不育株

Figure 2. Monokaryons obtained from AgQL8125

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图 3 AgQG841分离的同核不育株

Figure 3. Monokaryons obtained from AgQG841

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图 4 同核不育单孢的酯酶同工酶带型

注:泳道1为对照菌株As2796, 泳道2~10为表 1中对应的1~9号菌株。

Figure 4. Esterase isoenzyme patterns of monokaryons

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图 5 两两杂交配对结果

注:A 为9607×9608杂交, B 为9604×9608杂交, C 为9604×9609杂交, D 为9604×AgQL8125-5杂交, E 为M7206-1×AgQG841-1杂交, F 为M7206-1×AgLH830-6杂交。

Figure 5. Pair-wise cross of monokaryons

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图 6 双孢蘑菇基因组DNA酶切前和酶切后的电泳结果

注:M 为λDNA/Eco RI+Hind Ⅲ Markers.1为未酶切的双孢蘑菇基因组A+DNA; 2为未酶切的双孢蘑菇基因组A-DNA; 3为SalⅠ酶切后的双孢蘑菇基因组A+ DNA; 4为SalⅠ酶切后的双孢蘑菇基因组A-DNA; 酶切条件:酶量为0.4 U·mg^-1 DNA, 37℃反应1 h。

Figure 6. Agarose gel electrophoreisis of A.bisporus genome DNA sample before

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图 7 转化子DNA的SalⅠ酶切电泳结果

注:1为SalⅠ酶切后的重组子λDNA, 2为转化子λDNA; M为λDNA/EcoRI+HindⅢ Markers。

Figure 7. Agarose gel electrophoreisis of recombinant phage DNA sample before and after SalⅠ digestion

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表 1 供试菌株编号及来源

Table 1. Strains tested number and Origin

编号	菌株	来源
1	9601	分离自 As2796
2	9602	分离自 As2796
3	9603	分离自 As2796
4	9604	分离自 As2796
5	9605	分离自 As2796
6	9606	分离自 As2796
7	9607	分离自 As2796
8	9608	分离自 As2796
9	9609	分离自 As2796
10	9612	分离自 As2796
11	AgQG841-1	分离自野生菌株 AgQG841
12	AgQG841-3	分离自野生菌株 AgQG841
13	AgQG841-9	分离自野生菌株 AgQG841
14	Ag2k811-1	分离自野生菌株 Ag2k811
15	Ag2k811-3	分离自野生菌株 Ag2k811
16	AgLH830-4	分离自野生菌株 AgLH830
17	AgLH830-6	分离自野生菌株 AgLH830
18	AgLH830-7	分离自野生菌株 AgLH830
19	AgQL8125-3	分离自野生菌株 AgQL8125
20	AgQL8125-5	分离自野生菌株 AgQL8125
21	M7206-1	分离自 M7206
22	M7206-2	分离自 M7206
23	M7206-11	分离自 M7206
24	M7206-13	分离自 M7206

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表 2 供试菌株两两配对杂交

Table 2. Two-pair hybridization of the tested strains

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15	16	17	18	19	20	21	22	23	24
1				+										+									+
2								+				+
3					+					+
4	+							+	+								+			+
5			+
6
7								+	+
8		+		+			+														+	+
9				+			+
10			+												+						+
11																					+
12		+
13
14	+											+
15										+
16																					+
17				+																				+
18
19
20				+
21								+			+	+				+
22								+
23	+
24																		+
注:“+”表示菌株间可以杂交配对。

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参考文献(9)

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[3]	RAPER CA, KAYE G.Sexual and Other Relationships in the Genus Agaricus[J].J Gen Microbiol.1978, 105(1):135-151. doi: 10.1099/00221287-105-1-135
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[5]	XU J, KERRIGAN RW, HORGEN PA, et al.Localization of the mating type gene in Agaricus bisporus[J].Appl.Environ.Microbiol.1993, 59(9):3044-3049. doi: 10.1007/BF00279535.pdf
[6]	LI Y, CHALLEN MP, ELLIOTT TJ, et al.Molecular Analysis of Breeding Behavior in Agaricus species[J].Mushroom Sci.2004, 16:103-109. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC91888/
[7]	陈美元, 廖剑华, 李洪荣, 等.双孢蘑菇栽培菌株遗传多样性的DNA指纹分析[J].中国农学通报, 2009, 25(4):149-156. http://d.old.wanfangdata.com.cn/Periodical/zgnxtb200904036
[8]	王泽生, 陈美元, 廖剑华, 等.双孢蘑菇部分cDNA文库的构建及筛选[J].菌物学报, 2004, (1):63-65. http://d.old.wanfangdata.com.cn/Periodical/jwxt200401013
[9]	J·萨姆布鲁克, EF·弗里奇, T·曼尼阿蒂斯.分子克隆实验指南:第2版[M].北京:科学出版社, 1992:1-1062.