滇中茶树种质资源亲缘关系的ISSR分析

吴田; 蓝增全; 王华芳

doi:10.19303/j.issn.1008-0384.2017.012.005

滇中茶树种质资源亲缘关系的ISSR分析

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.012.005

吴田^1,,
蓝增全^2, ,,
王华芳^3, ,

1.
西南林业大学园林学院, 云南昆明 650224
2.
西南林业大学环境科学与工程学院, 云南昆明 650224
3.
北京林业大学生物科学与技术学院, 北京 100083

基金项目:

中西部高等学校青年骨干教师国内访问学者项目 2016-2017

澜沧江流域古茶研究项目 2017

昌宁县茶树资源保护利用项目 2017

详细信息

作者简介:
吴田(1980-), 女, 博士, 副教授, 研究方向:植物分子生物学(E-mail:461257271@qq.com)

通讯作者:
蓝增全(1963-), 男, 教授, 研究方向:茶学(E-mail:2351417655@qq.com)

王华芳(1956-), 男, 教授, 研究方向:植物生物技术(E-mail:2951175149@qq.com)

中图分类号: S571
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出版历程
- 收稿日期: 2017-01-17
- 修回日期: 2017-10-18
- 刊出日期: 2017-12-28

ISSR-based Genetic Analysis on Relationship of Teas in Central Yunnan

WU Tian^1
,,
LAN Zeng-quan^{2
, ,},
WANG Hua-fang^{3
, ,}

1.
College of Horticulture and Gardening, Southwest Forestry University, Kunming, Yunnan 650224, China
2.
College of Environment Science and Engineering, Southwest Forestry University, Kunming, Yunnan 650224, China
3.
College of Biological Science and Technology, Beijing Forestry University, Beijing 100083, China

摘要

摘要: 采用ISSR技术对滇中不同地区17份有代表性的茶样的亲缘关系进行研究。随机选择28条ISSR引物进行筛选, 获得15条能产生清晰条带的引物。将这些引物分别进行ISSR-PCR扩增, 共获得稳定且清晰的谱带112条, 多态性谱带103条, 多态性比率为91.96%, 平均每条引物扩增出7.4条谱带。17份滇中茶样的遗传相似系数变化范围为0.58-0.80, 聚为两类, 第Ⅰ类包含12份种质, 第Ⅱ类包含5份种质。
- 宝洪茶 /
- 十里香茶 /
- ISSR /
- 亲缘关系
Abstract: The genetic relationship among 17 representative tea cultivars from various regions in central Yunnan was analyzed using ISSR markers.Out of the randomly selected 28 primers in testing DNA polymorphism of the teas, 15 produced distinctive bands and were chosen for amplification.The ISSR-PCR amplified primers showed 112 stable and clearly defined bands.Of which, 103 were polymorphic (a rate of 91.96%) averaging 7.4 bands each.The GS scores on the cultivars ranged from 0.58 to 0.80 with discrete classifications of Group Ⅰ that consisted of 12 germplasms and Group Ⅱ that composed of the remaining 5 germplasms.
- central Yunnan /
- tea cultivars /
- ISSR-PCR /
- genetic relationship

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图 1 17个茶样的DNA电泳结果

Figure 1. Agarose gel electrophoresis of genomic DNA from 17 tea cultivars

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图 2 ISSR引物筛选

注:M为DNA marker, 1为814, 2为823, 3为815, 4为818, 5为824, 6为825, 7为836, 8为840, 9为841, 10为835, 11为826, 12为842, 13为844, 14为845, 15为847, 16为848, 17为846, 18为827, 19为856, 20为858, 21为853, 22为857, 23为850, 24为854, 25为855, 26为854, 27为855, 28为866。

Figure 2. Screening of ISSR primers

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图 3 引物841最佳退火温度的确定

注:M为DNA marker, 1为50.0℃, 2为51.2℃, 3为51.7℃, 4为52.6℃, 5为53.6℃, 6为54.5℃, 7为55.5℃, 8为56.4℃, 9为57.4℃, 10为58.2℃, 11为58.8℃, 12为59.0℃。

Figure 3. Determination of optimal annealing temperature for primer 841

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图 4 引物815在17份茶样材料中扩增的电泳

注:M为DNA marker 2000, 1~17为表 1茶样。

Figure 4. Electrophoresis of amplified primer 815 in 17 tea cultivars

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图 5 引物845在17份茶样材料中扩增的电泳

注:M为DNA marker 2000, 1~17为表 1茶样。

Figure 5. Electrophoresis of amplified primer 815 in 17 tea cultivars

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图 6 17个滇中茶样的UPGMA聚类

Figure 6. UPGMA-derived dendrogram on 17 tea cultivars

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表 1 供试茶样信息

Table 1. Information on tea cultivars under study

编号	种质资源名称	取样地	叶片颜色	叶面积/cm²	叶柄长度/cm	叶脉数/对
1	楚雄-双柏	楚雄州双柏县鄂嘉镇	绿色	15.3	0.4	7.4
2	玉溪-者竜	玉溪市新平县者竜乡	深绿	14.2	0.5	7.3
3	楚雄-新房子村	楚雄州双柏县爱尼山乡	绿	24.6	0.5	10
4	玉溪-原古	玉溪市元江县羊岔街乡	深绿	32.9	0.7	7.1
5	玉溪-双江	玉溪市峨山县双江镇	绿色	31.1	0.7	10.2
6	玉溪-羊街	玉溪市元江县羊街乡	深绿	24.3	0.6	8
7	昆明-十里香2号	昆明市云南农业大学茶园	深绿	34.2	0.3	12.8
8	昆明-农大小叶种	昆明市云南农业大学茶园	深绿	23.7	0.3	11.8
9	昆明-农大大叶种	昆明市云南农业大学茶园	深绿	44.5	0.4	11.5
10	昆明-宝洪3号	昆明市宜良县匡远镇	深绿	35.3	0.4	8.1
11	昆明-宝洪1号	昆明市宜良县匡远镇	绿色	38.8	0.4	11.2
12	昆明-十里香1号	昆明市云南农业大学茶园	深绿	29.7	0.2	12.3
13	玉溪-界碑村	玉溪市新平县者竜乡	绿色	26.8	0.5	9.8
14	大理-罗伯克	大理州南涧县公郎镇	绿色	41.1	0.4	8.2
15	昆明-宝洪2号	昆明市宜良县匡远镇	绿色	39.3	0.4	9.1
16	楚雄-兔街	楚雄州南华县兔街镇	绿色	21.7	0.5	7.3
17	大理-大栗树	大理州云龙县宝丰乡	绿色	40.2	0.5	8.2

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表 2 引物最佳退火温度探索结果信息

Table 2. Search results on optimal annealing temperature for primers

引物	序列(5′~3′)	最佳退火温度/℃
815	CTCTCTCTCTCTCTCTG	55.0
818	CACACACACACACACAG	52.6
824	TCTCTCTCTCTCTCTCG	53.0
835	AGAGAGAGAGAGAGAGYC	53.0
836	AGAGAGAGAGAGAGAGYA	54.0
840	GAGAGAGAGAGAGAGAYT	58.0
841	GAGAGAGAGAGAGAGAYC	53.6
842	GAGAGAGAGAGAGAGAYG	56.0
844	CTCTCTCTCTCTCTCTRC	56.8
845	CTC TCTCTCTCTCTCTRG	58.0
847	CACACACACACACACARC	56.0
854	TCTCTCTCTCTCTCTCRG	56.6
855	ACACACACACACACACYT	58.8
857	ACACACACACACACACYG	55.0
866	CTCCTCCTCCTCCTCCTC	58.0

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