Isolation and Identification of Duck Plague Virus and Sequence Analysis on Its UL2 and TK Genes
-
摘要: 2015年，福建省福州地区2个鸭场（M18肉鸭场及蛋鸭场）发生大量鸭死亡，初诊疑似鸭瘟。为明确其病原，分别采集病死鸭肝脏、食道样品进行鸭瘟病毒特异性PCR检测和病毒分离，对获得的2株病毒分离株分别进行鸭已知病原的检测，确定均为鸭瘟病毒。对新分离鉴定的2株鸭瘟病毒株的UL2基因进行序列测定及分析发现，均具有强毒株的分子特征；经TK基因序列测定及分析表明，2株新分离的鸭瘟病毒株与强毒代表株、弱毒疫苗株的TK基因核苷酸同源性均高达98.7%。Abstract: In March 2015, massive deaths happened to the M18 Duck Farm and an egg-laying duck farm in Fuzhou. It was suspected of an outbreak of duck plaque. Samples of liver and esophagus from the dead birds were collected for pathogenic identification using PCR and virus isolation. Two strains with virulent characteristics were thus identified. Subsequently, a sequence analysis on their UL2 genes further confirmed the classification. In addition, the TK gene sequences of the two isolated virus strains showed a nucleotide homology of 98.7% with those of the common virulent strain as well as the vaccine strain.
-
Key words:
- virulent duck plague virus /
- isolation and identification /
- UL2 gene /
- TK gene /
- sequence analysis
-
图 1 临床采集样品的PCR检测
注：M为DNA 2000 Marker；1为阳性对照；2为阴性对照；3为病死麻鸭食道样品；4为病死M18肉鸭食道样品；5为病死麻鸭肝脏样品；6为病死M18肉鸭肝脏样品；7为鸭流感病毒；8为鸭1型副粘病毒；9为鸭细小病毒；10为鸭坦布苏病毒；11为鸭甲肝病毒；12为鸭呼肠孤病毒；13为鸭圆环病毒；14为鸭疫里默氏菌；15为鸭致病性大肠杆菌；16为鸭沙门氏菌。
Figure 1. PCR detection on clinical samples
图 2 分离病毒的PCR检测
注：M为DNA 2000 Marker；1为阳性对照；2为阴性对照；3为FJ-1501；4为FJ-1502；5为鸭流感病毒；6为鸭1型副粘病毒；7为鸭细小病毒；8为鸭坦布苏病毒；9为鸭甲肝病毒；10为鸭呼肠孤病毒；11为鸭圆环病毒；12为鸭疫里默氏菌；13为鸭致病性大肠杆菌；14为鸭沙门氏菌。
Figure 2. PCR detection of isolated viruses
图 3 鸭瘟病毒UL2基因的扩增
注：M为DNA 2000 Marker；1为阴性对照；2为FJ-1501；3为FJ-1502；4为A公司鸭瘟弱毒疫苗；5为B公司鸭瘟弱毒疫苗。
Figure 3. Amplification of DPV UL2 gene
图 5 鸭瘟病毒TK基因的扩增
注：M为DNA 2000 Marker；1为阳性对照；2为阴性对照；3为FJ-1501；4为FJ-1502；5为A公司鸭瘟弱毒疫苗；6为B公司鸭瘟弱毒疫苗。
Figure 5. Amplification of DPV TK gene
-
[1] SAIF Y M.禽病学[M].苏敬良, 高福, 索勋, 译. 12版.北京:中国农业出版社, 2012:444-454. [2] DAVISON A J, EBERLE R, EHLERS B, et al. The order Herpesvirales[J]. Arch Virol, 2009, 154(1):171-177. doi: 10.1007/s00705-008-0278-4 [3] WANG J, HOPER D, BEER M, et al. Complete genome sequence of virulent duck enteritis virus (DEV) strain 2085 and comparison with genome sequences of virulent and attenuated DEV strains[J]. Virus Res, 2011, 160(1-2):316-325. doi: 10.1016/j.virusres.2011.07.004 [4] LI Y, HUANG B, MA X, et al. Molecular characterization of the genome of duck enteritis virus[J]. Virology, 2009, 391(2):151-161. doi: 10.1016/j.virol.2009.06.018 [5] 黄引贤, 欧守杼, 邝荣禄, 等.鸭瘟病毒的研究[J].华南农学院学报, 1980, (1):21-36. [6] 孟刚, 王经满, 曹瑞兵. 2株鸭瘟病毒强毒株的分离鉴定[J].畜牧与兽医, 2012, (4):59-62. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-XMYS201204019.htm [7] 吕桂霞. "新型鸭瘟"流行病学及病原特性的研究[D].泰安:山东农业大学, 2003. [8] 魏笑笑, 高亚东, 刘志杰, 等.一株鸭瘟病毒(GM株)的分离与鉴定[J].中国家禽, 2015, (6):63-65. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZGJQ201506020.htm [9] 姜甜甜, 张大丙.鸭瘟强毒与疫苗毒的囊膜糖蛋白序列比较[J].中国兽医杂志, 2013, (2):3-7. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZSYZ201302002.htm [10] 孟日增, 石建平, 肖成蕊, 等.鸭瘟病毒PCR检测方法的建立及验证[J].中国生物制品学杂志, 2009, (7):709-712. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-SWZP200907029.htm [11] 董嘉文, 黄永亮, 牛学锋, 等.鸭瘟病毒GD株TK、dUTPase和PK基因的克隆及序列分析[J].动物医学进展, 2010, (5):53-57. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-DYJZ201005014.htm [12] 余爱花, 杨阳, 张宝来, 等.鸭瘟病毒YZH株的分离鉴定及其TK基因的序列分析[J].动物医学进展, 2012, (12):133-137. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-DYJZ201212032.htm [13] 李昌主, 韩先杰, 邹玲, 等.鸭瘟病毒AV1221株TK基因的克隆与序列分析[J].青岛农业大学学报:自然科学版, 2007, (3):162-164. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-LYXI200703002.htm [14] 张馨月, 张存, 冉多良.鸭瘟病毒强弱毒株TK基因的克隆及序列比较分析[J].新疆农业大学学报, 2007, (4):29-33. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-XJNY200704005.htm [15] 李文杨, 程龙飞, 黄瑜.某北京鸭场暴发鸭瘟的诊断与控制[J].中国家禽, 1998, (9):47-49. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZGJQ809.031.htm -
下载:
点击查看大图
计量
- 文章访问数: 1534
- HTML全文浏览量: 247
- PDF下载量: 503
- 被引次数: 0
