Embryo Culture for Orchid Hybrid Crossedbetween Beallara Marfitch and Oncidium Sweet Sugar
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摘要: 以文心兰‘红狐狸’与‘百万金币’杂种胚为外植体，采用种胚→原球茎→完整植株→移栽的途径，探讨植物生长调节剂、有机添加物等因素对文心兰杂种胚萌发、原球茎分化、生根等各阶段的影响，建立文心兰杂种胚离体培养及植株再生技术。结果表明，适宜萌发的培养基为花宝+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+CM 150 g·L-1+AC 1.0 g·L-1+蔗糖20 g·L-1，培养90～100 d后相对萌发率为155.6%，原球茎基本不增殖，利于叶的分化；适宜分化的培养基为花宝+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+马铃薯泥150 g·L-1+AC 1.0 g·L-1+蔗糖25 g·L-1，分化率显著最高，为87.8%，添加马铃薯泥能显著提高分化率，促进芽苗的粗壮；将分化的芽苗在花宝+NAA 0.2 mg·L-1+马铃薯泥150 g·L-1+AC 1.5 g·L-1+蔗糖25 g·L-1培养基上培养40 d后生根率为100%，且根系发达，植株健壮；生根苗炼苗后以水苔作为基质，移栽成活率达91.7%。Abstract: Embryos of the orchidhdyridcrossed between Beallara Marfitch Howards Dream and Oncidium Sweet Sugar Million Dollar were usedas explants in a cultivation experimentation to study the effects of various growth regulators and organic additives on its germination, protocorm differentiation, and rooting, from the formations of embryos and protocorms to the development and transplantation of the plants. Aculture medium consisting of Hyponex, 6-BA 0.5 mg·L-1, NAA 0.1 mg·L-1, CM 150 g·L-1, AC 1.0 g·L-1, and sugar 20 g·L-1 provided an optimal relative embryo germination rate of 155.6% for the hybrid after 90-100 d of cultivation. In addition, the medium inhibited the protocorm proliferation, and thus, encouraged its differentiation subsequently. For the protocorm differentiation, a medium containing Hyponex, 6-BA 0.1 mg·L-1, NAA 0.1 mg·L-1, mashed potato 150 g·L-1, AC 1.0 g·L-1, and sugar 25 g·L-1 rendered asignificantly higher rate of 87.8% thanother media tested. The addition of mashed potatoes in the medium significantly increased the differentiation ratepromoting the seedling growth. Vigorously growing plantlets were, then, transferred to a medium containing Hyponex, NAA 0.2 mg·L-1, mashed potato 150 g·L-1, AC 1.5 g·L-1, and sugar 25 g·L-1 for a complete and well-developed rooting on the healthy and well-developed plantlets with 40 d of cultivation.After an initial adaptation period, the survival rate of the transplanted seedling sreached 91.7% on peat moss.
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Key words:
- oncidium /
- hybrid embryo /
- embryo culture /
- protocorm
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图 1 文心兰杂种胚培养及植株再生
注：A为杂交果荚及种胚；B为杂种胚萌发；C为生根；D为完整植株；E为移栽成活的小苗。
Figure 1. Embryo culture and regeneration of Oncidiumhybrid
表 1 不同生长调节剂组合对杂种胚萌发的影响
Table 1. Effect of growth hormones on embryogermination of hybrid
生长调节剂组合/(mg·L-1) 萌发时间
/d相对萌发率
/%原球茎生长情况 6-BA NAA 0 0 120~130 100.0 d 基本无增殖，深绿色，顶端叶的分化少 0.5 0.05 90~100 139.3 c 基本无增殖，深绿色，顶端叶的分较多 0.5 0.1 90~100 155.6 b 基本无增殖，深绿色，顶端叶的分化多 0.5 0.2 90~100 147.7 bc 生长易玻璃化，浅绿色 1.0 0.05 90~100 175.4 a 增殖较多，浅绿色，顶端叶的分化少 1.0 0.1 90~100 180.7 a 增殖较多，浅绿色，顶端叶的分化少 1.0 0.2 90~100 180.9 a 增殖较多，浅绿色，水渍状，玻璃化严重 注：同列数据后不同小写字母表示差异达显著水平为(P < 0.05)。表 2~4同。 
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表 2 不同生长调节剂组合对原球茎分化的影响
Table 2. Effect of growth hormones on protocorm differentiation
生长调节剂组合/(mg·L-1) 增殖率
/%分化率
/%原球茎生长表现 6-BA NAA 0.05 0.05 108.9 d 56.7 e 基本无增殖，分化较少，有出根，叶生长慢 0.05 0.1 106.7 d 61.1 de 基本无增殖，分化较少，出根少，叶生长慢 0.05 0.2 105.6 d 67.8 cd 基本无增殖，分化较少，出根较多 0.1 0.05 121.1 c 80.0 b 增殖少，分化较多，有出根，叶生长较慢 0.1 0.1 116.7 c 87.8 a 增殖少，分化多，出根少，生长速度中等，芽苗粗壮 0.1 0.2 117.8 c 74.4 bc 增殖少，分化较多，出根多，易出现玻璃化 0.2 0.05 138.9 b 38.9 f 增殖较多，分化少 0.2 0.1 141.1 b 36.7 f 增殖较多，分化少，出根较多 0.2 0.2 155.6 a 34.4 f 增殖较多，分化少，出根多，玻璃化严重
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表 3 不同有机添加物对原球茎分化影响
Table 3. Effect of organic compounds on protocorm differentiation
有机添加物
/(g·L-1)增殖率
/%分化率
/%生长表现 150 CM 123.3 a 77.8 b 增殖较多，分化较少，芽苗较细弱 150马铃薯泥 116.7 a 87.8 a 增殖少，分化多，芽苗粗壮 150香蕉泥 118.9 a 82.1 ab 增殖较少，分化较多，芽苗后期长势较差
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表 4 不同NAA浓度对生根的影响
Table 4. Effect of NAA concentrations on rooting of seedlings
NAA浓度
/(mg·L-1)生根率
/%平均根数
/条平均根长
/cm0 89.7 b 2.3 d 1.4 c 0.1 100.0 a 5.7 c 2.2 b 0.2 100.0 a 7.2 a 2.6 a 0.4 100.0 a 6.8 ab 2.5 a
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