Prokaryotic Expression of 3 GT Gene from Narcissus tazetta var. Chinensis
-
摘要: 通过双酶切、连接转化等方法将中国水仙类黄酮-3-O-葡糖基转移酶（NT3GT）基因克隆到原核表达载体pET29a上，构建原核表达重组质粒pET29a-NT3GT。重组质粒转化至E.coli BL21（DE3）后经IPTG诱导，SDS-PAGE分析表明，经IPTG诱导，NT3GT基因在大肠杆菌BL21（DE3）中获得了高效表达，表达的融合蛋白分子量约为55 kDa。成功构建其原核表达载体并使其在大肠杆菌中得到高效表达，为NT3GT抗血清的制备及功能分析奠定基础。
-
关键词:
- 中国水仙 /
- 类黄酮-3-氧-葡糖基转移酶 /
- 原核表达
Abstract: Flavonoid 3-O-glucosyltransferase(Nt3GT) gene of Narcissus tazetta var. Chinensis was cloned into the vector, pET29a, to construct prokaryotic expression recombinant plasmid, pET29a-NT3GT.The recombinant plasmid was transferred to E.coli BL21(DE3) to be induced by IPTG. Subsequently, the expression of the target protein was verified by SDS-PAGE. Then, pET29a-Nt3GT was successfully constructed, which induced the 55 kDa recombinant protein of Nt3GT in the prokaryotic expression system. Nt3GT was cloned, and its vector was constructed and induced to be expressed successfully by IPTG in BL21 providing a basis for theantiserum preparation and functional analysis in the future.-
Key words:
- Narcissus tazetta var. Chinensis /
- 3GT /
- prokaryotic expression
-
图 1 Nt3GT基因的获得
M为DNA marker (100~2 000 bp); 1、2为Nt3GT基因双酶切。
Figure 1. Obtaining of Nt3GT gene
图 2 重组质粒的检测与鉴定
M为分子量标记；A为重组质粒的Nt3GT特异扩增检测；B为重组质粒双酶切鉴定。
Figure 2. PCR detection and identification of recombinant plasmid
图 3 重组质粒PCR鉴定
M为分子量标记，1~3为目的基因。
Figure 3. PCR identification of recombinant plasmid IPTG
-
[1] YOSHIKAZU TANAKA, FILIPPA BRUGLIERA, STEVE CHANDLER. Recent Progress of Flower Colour Modification by Biotechnology [J].Int J Mol Sci, 2009, 10:5350-5369. doi: 10.3390/ijms10125350 [2] 张龙, 李卫华, 姜淑梅, 等.花色素苷生物合成与分子调控研究进展[J].园艺学报, 2008, 35(6):909-916. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-YYXB200806025.htm [3] 王军, 侯丙凯.植物小分子化合物的糖基化与糖基转移酶[J].植物生理学通讯, 2008, 44(5):997-1003. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZWSL200805044.htm [4] 王伟英, 李海明, 戴艺民, 等.中国水仙类黄酮-3-O-葡糖基转移酶基因的克隆与表达分析[J].福建农业学报, 2015, 30(6):577-581. http://www.fjnyxb.cn/CN/abstract/abstract2984.shtml [5] 王毅, 王晨晨, 周旭, 等.七彩红中竹类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶基因的克隆及功能分析[J].广西植物, 2015, 35(2):244-249. http://www.cnki.com.cn/article/cjfdtotal-gxzw201502016.htm [6] 卢其能, 杨清, 沈春修.马铃薯类黄酮-3-O-葡萄糖基化酶基因的克隆与表达分析[J].华北农学报, 2009, 24(4):11-16. http://www.oalib.com/paper/4832939 [7] 肖继坪, 李俊, 郭华春.彩色马铃薯类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶基因(3GT)的生物信息学与表达分析[J].分子植物育种, 2015, 13(5):2017-2026. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-FZZW201505013.htm [8] 曾黎辉, 罗鹏, 吴雪琴.类黄酮合成途径结构基因的表达分析与中国水仙不能合成花青素原因的初步解析[J].现代园林, 2015, 12(4):295-296. http://www.cnki.com.cn/article/cjfdtotal-nyyl201504023.htm [9] 邢爱佳.罗汉果葡萄糖基转移酶基因的克隆及原核表达[D].南宁:广西大学, 2013. [10] 马成英, 吕海鹏, 林智, 等.茶树类黄酮O-甲基转移酶基因的克隆及原核表达分析[J].中国农业科学, 2013, 46(2):325-333. http://www.cnki.com.cn/article/cjfdtotal-znyk201302011.htm [11] ESPOSITO D, CHATTERJEE D K. Enhancement of soluble protein expression through the use of fusion tags[J].Current Opinion in Biotechnology, 2006, 17(4): 353-358. doi: 10.1016/j.copbio.2006.06.003 [12] 王卓, 刘学群, 刘新琼, 等.新烟草糖基转移酶原核表达质粒的构建及诱导[J].湖北农业科学, 2008, 47(4):376-378. http://www.cqvip.com/qk/93129x/200804/27172492.html [13] 陈娇, 孙长君, 杨昭, 等.香蕉多酚氧化酶成熟蛋白的原核表达[J].热带作物学报, 2015, 36(12):2198-2203. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-RDZX201512015.htm [14] 高永贵, 关怡新, 姚善径.包涵体蛋白的变复性研究[J].科技通报, 2003, 19 (1):10-15. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-KJTB200301003.htm -
下载:
点击查看大图
图(4)
计量
- 文章访问数: 1688
- HTML全文浏览量: 275
- PDF下载量: 269
- 被引次数: 0
