水稻密码子优化的cry1Ca基因在大肠杆菌中表达、纯化及抗体制备

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水稻密码子优化的cry1Ca基因在大肠杆菌中表达、纯化及抗体制备

林智敏, 陈在杰, 胡太蛟, 胡昌泉, 颜静宛, 苏军, 王锋

文章导航 > 福建农业学报 > 2011 > 26(1): 24-28

林智敏, 陈在杰, 胡太蛟, 胡昌泉, 颜静宛, 苏军, 王锋. 水稻密码子优化的cry1Ca基因在大肠杆菌中表达、纯化及抗体制备[J]. 福建农业学报, 2011, 26(1): 24-28.

引用本文:

林智敏, 陈在杰, 胡太蛟, 胡昌泉, 颜静宛, 苏军, 王锋. 水稻密码子优化的cry1Ca基因在大肠杆菌中表达、纯化及抗体制备[J]. 福建农业学报, 2011, 26(1): 24-28.

LIN Zhi-min, CHEN Zai-jie, HU Tai-jiao, HU Chang-quan, YAN Jing-wan, SU Jun, WANG Feng. Expression and purification of rice codon optimized His-cry1Ca fusion protein in E.coli and preparation of polyclonal antibody against cry1Ca[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2011, 26(1): 24-28.

Citation:

LIN Zhi-min, CHEN Zai-jie, HU Tai-jiao, HU Chang-quan, YAN Jing-wan, SU Jun, WANG Feng. Expression and purification of rice codon optimized His-cry1Ca fusion protein in E.coli and preparation of polyclonal antibody against cry1Ca[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2011, 26(1): 24-28.

林智敏, 陈在杰, 胡太蛟, 胡昌泉, 颜静宛, 苏军, 王锋. 水稻密码子优化的cry1Ca基因在大肠杆菌中表达、纯化及抗体制备[J]. 福建农业学报, 2011, 26(1): 24-28.

引用本文:

林智敏, 陈在杰, 胡太蛟, 胡昌泉, 颜静宛, 苏军, 王锋. 水稻密码子优化的cry1Ca基因在大肠杆菌中表达、纯化及抗体制备[J]. 福建农业学报, 2011, 26(1): 24-28.

LIN Zhi-min, CHEN Zai-jie, HU Tai-jiao, HU Chang-quan, YAN Jing-wan, SU Jun, WANG Feng. Expression and purification of rice codon optimized His-cry1Ca fusion protein in E.coli and preparation of polyclonal antibody against cry1Ca[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2011, 26(1): 24-28.

Citation:

LIN Zhi-min, CHEN Zai-jie, HU Tai-jiao, HU Chang-quan, YAN Jing-wan, SU Jun, WANG Feng. Expression and purification of rice codon optimized His-cry1Ca fusion protein in E.coli and preparation of polyclonal antibody against cry1Ca[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2011, 26(1): 24-28.

水稻密码子优化的cry1Ca基因在大肠杆菌中表达、纯化及抗体制备

1.
福建省农业科学院农业遗传工程重点实验室, 福建, 福州, 350003

基金项目:

福建省属公益类科研院所基本科研专项(2009R10035-3、2010R1021-3);福建省科技计划重点项目(2007Y0057)

通讯作者:
王锋(1963-),男,博士,研究员,研究方向水稻分子育种(E-mail:wf@126.com)

中图分类号: TS201.1
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- 被引次数: 0
出版历程
- 收稿日期: 2010-11-29
- 修回日期: 2011-01-09
- 刊出日期: 2011-02-15

Expression and purification of rice codon optimized His-cry1Ca fusion protein in E.coli and preparation of polyclonal antibody against cry1Ca

1.
Fujian Provincial Key Laboratory of Genetic Engineering for Agriculture, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou, Fujian 350003, China

摘要: 将水稻偏好密码子优化并人工合成抗虫基因cry1Ca通过限制性内切酶酶切的方法构建原核表达载体pET-28bca,成功表达了带6个组氨酸标签的His-cry1Ca融合蛋白,其表达量约占菌体总蛋白的24%,表达的融合蛋白主要以包涵体的形式存在。对包涵体蛋白进行可溶性处理,亲和纯化出带6个组氨酸标签的融合蛋白,将其作为抗原免疫家兔获得了滴度(ELISA)为l:50000的抗血清,并具有较强的特异性。
- cry1Ca基因 /
- 原核表达 /
- 融合蛋白 /
- 多克隆抗体
Abstract: Rice codon optimized cry1Ca gene was cloned into expression vector pET-28b(+) by means of restricted enzymatic digestion.His-cry1Ca fusion protein was highly expressed by SDS-PAGE analysis accumulating more than 24% of the total bacterial proteins.The main expression production was deposited as inclusion body.His-cry1Ca was then purified with Ni-NTA after treatment of solvents.The target protein was used as the antigen to immunize rabbits.ELISA assay showed that the titer of the prepared polyclonal antibody was 1:50000,and had high specificities.
- cry1Ca gene /
- prokaryotic expression /
- fusion protein /
- polyclonal antibody

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