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草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立

王晓丰 薛晖 丁正峰 唐建清 夏爱军 熊怀生

王晓丰, 薛晖, 丁正峰, 唐建清, 夏爱军, 熊怀生. 草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立[J]. 福建农业学报, 2012, 27(5): 465-469.
引用本文: 王晓丰, 薛晖, 丁正峰, 唐建清, 夏爱军, 熊怀生. 草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立[J]. 福建农业学报, 2012, 27(5): 465-469.
WANG Xiao-feng, XUE Hui, DING Zheng-feng, TANG Jian-qing, XIA Ai-jun, XIONG Huai-sheng. Development of a Reverse Transcription Loop-mediated Isothermal Amplification(RT-LAMP) Method for Grass Carp Reovirus[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2012, 27(5): 465-469.
Citation: WANG Xiao-feng, XUE Hui, DING Zheng-feng, TANG Jian-qing, XIA Ai-jun, XIONG Huai-sheng. Development of a Reverse Transcription Loop-mediated Isothermal Amplification(RT-LAMP) Method for Grass Carp Reovirus[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2012, 27(5): 465-469.

草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立

基金项目: 

国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-46-31)

详细信息
    通讯作者:

    薛晖(1968- ),男,硕士,研究员级高级工程师,主要从事水产病害研究(E-mail:jsxuehui@163.com)

  • 中图分类号: S917

Development of a Reverse Transcription Loop-mediated Isothermal Amplification(RT-LAMP) Method for Grass Carp Reovirus

  • 摘要: 为更加快速、灵敏地检测草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus, GCRV),建立环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。根据GenBank中GCRV HZ08等毒株VP6蛋白基因序列设计引物,以GCRV弱毒疫苗株(GCHV-892)总RNA为模板建立RT-LAMP反应,对扩增产物用限制性内切酶PvuⅡ进行酶切鉴定,所得酶切产物大小符合预期值。随后对LAMP反应体系包括Mg2+、dNTPs、甜菜碱(betaine)和内外引物浓度比进行了优化,并以含VP6蛋白基因的重组质粒(pEASY-VP6)为模板考量了该方法的敏感性,结果显示最低检测限为10 copies·μL-1,比RT-PCR检测方法敏感10倍。特异性试验表明与白斑综合征病毒(WSSV)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、病毒性神经坏死病毒(VNNV)无交叉反应。应用RT-LAMP方法检测16份疑似出血病草鱼,6份病料获得了阳性扩增,与RT-PCR检测结果一致。
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出版历程
  • 收稿日期:  2012-03-10
  • 修回日期:  2012-04-06
  • 刊出日期:  2012-05-30

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